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干扰素调节因子1(Interferon regulatory factor-l，IRF-1)，是干扰素调节因子家族成员之一，可以激活I类干扰素基因的转录，被证明有调节细胞增殖、凋亡、免疫等多方面的生物学功能。牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为单链RNA病毒，主要引起牛病毒性腹泻，并且可感染多种偶蹄类动物；牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)为双链DNA病毒，主要感染牛，引起牛呼吸道疾病、结膜病、生殖道疾病多种疾病。这两种病毒引起的疾病没有行之有效的治疗方法，给我国畜牧业造成了巨大损失，我国进出境牛及其产品大多有对这两种疫病检疫的要求。
为研究转IRF-1基因细胞对BVDV和IBRV的抗性，进一步为生产抗病转基因家畜奠定基础；本研究制备了牛胎儿成纤维细胞，将携带IRF-1基因的pIRES2-EGFP-IRF-I载体通过转基因的方法转染牛胎儿成纤维细胞，获得了瞬时表达IRF-I基因的转基因细胞，然后用BVDV和IBRV作用于转基因细胞，对IRF-1的相关抗性进行了研究。研究内容包括：
(1)建立了瞬时表达IRF-l基因的转基因细胞。采用组织块培养法结合胰蛋白酶消化法分离纯化得到牛胎儿成纤维细胞。然后利用新型脂质体FuGENE@HD将携带IRF-1基因的pIRES2-EGFP-IRF-1载体转染牛胎儿成纤维细胞，利用流式细胞仪分选法研究了FuGENE@HD与DNA比例对转基因效率的影响，并利用PCR对转基因细胞进行了鉴定。最后使用MTT法研究了转基因细胞和非转基因细胞的生长曲线，流式细胞仪分析了两种细胞的凋亡情况，并使用荧光定量PCR研究了转基因细胞和非转基因细胞中IRF-1基因的表达水平。结果显示：分离得到的牛胎儿成纤维细胞，细胞形态为梭形，呈漩涡状生长；FuGENE@HD与DNA的比例为8∶2(μL∶μg)转染效率最高，为11.27%;PCR鉴定获得的细胞为转基因细胞；牛胎儿成纤维细胞的生长呈“潜伏期-对数期-平台期”的生长模式，转基因细胞生长速度较慢；转基因细胞的凋亡率为9.6%±0.44，较对照组细胞显著提高(P＜0.05)；荧光定量PCR检测转基因细胞中目的基因的表达量显著高于对照组细胞(P＜0.05)。
(2)研究了BVDV对转基因细胞和对照细胞生物学特性的影响。使用MDBK细胞获得了病变情况良好的BVDV，然后利用标准滴度的病毒液作用于转基因细胞和对照细胞，分析了病毒在两种细胞中的滴度，病毒作用后细胞的生长曲线，细胞的凋亡情况。结果显示：病毒在对照细胞和转基因细胞中的滴度分别为10-6.4/0.1mL、10-5.6/0.1mL，差异显著；病毒作用后细胞生长曲线均呈现下降的趋势，但转基因细胞的生长曲线呈先升高后降低的趋势；非转基因细胞在72h的凋亡率高于转基因细胞的凋亡率，且差异极显著。这些结果说明IRF-1具有良好的抵抗BVDV作用的生物学功能。
(3)研究了IBRV对转基因细胞和对照细胞生物学特性的影响。使用MDBK细胞获得了病变情况良好的IBRV，然后利用500TCID50滴度的病毒液作用于转基因细胞和对照细胞，分析了病毒在两种细胞中的滴度，病毒作用后细胞的生长曲线，细胞的凋亡情况。结果显示：病毒在对照细胞和转基因细胞中的滴度分别为l0-6/0.1mL、10-5.8/0.1mL，差异不显著；病毒作用后细胞生长曲线均呈现下降的趋势，差异不显著；非转基因细胞在72h的凋亡率高于转基因细胞的凋亡率，且差异极显著。IBRV作用后转基因细胞与对照组形态无显著差异，而凋亡率显著降低，因此，本研究推测IRF-1对少量的IBRV具有抵抗作用。
为研究转IRF-1基因细胞对BVDV和IBRV的抗性，进一步为生产抗病转基因家畜奠定基础；本研究制备了牛胎儿成纤维细胞，将携带IRF-1基因的pIRES2-EGFP-IRF-I载体通过转基因的方法转染牛胎儿成纤维细胞，获得了瞬时表达IRF-I基因的转基因细胞，然后用BVDV和IBRV作用于转基因细胞，对IRF-1的相关抗性进行了研究。研究内容包括：
(1)建立了瞬时表达IRF-l基因的转基因细胞。采用组织块培养法结合胰蛋白酶消化法分离纯化得到牛胎儿成纤维细胞。然后利用新型脂质体FuGENE@HD将携带IRF-1基因的pIRES2-EGFP-IRF-1载体转染牛胎儿成纤维细胞，利用流式细胞仪分选法研究了FuGENE@HD与DNA比例对转基因效率的影响，并利用PCR对转基因细胞进行了鉴定。最后使用MTT法研究了转基因细胞和非转基因细胞的生长曲线，流式细胞仪分析了两种细胞的凋亡情况，并使用荧光定量PCR研究了转基因细胞和非转基因细胞中IRF-1基因的表达水平。结果显示：分离得到的牛胎儿成纤维细胞，细胞形态为梭形，呈漩涡状生长；FuGENE@HD与DNA的比例为8∶2(μL∶μg)转染效率最高，为11.27%;PCR鉴定获得的细胞为转基因细胞；牛胎儿成纤维细胞的生长呈“潜伏期-对数期-平台期”的生长模式，转基因细胞生长速度较慢；转基因细胞的凋亡率为9.6%±0.44，较对照组细胞显著提高(P＜0.05)；荧光定量PCR检测转基因细胞中目的基因的表达量显著高于对照组细胞(P＜0.05)。
(2)研究了BVDV对转基因细胞和对照细胞生物学特性的影响。使用MDBK细胞获得了病变情况良好的BVDV，然后利用标准滴度的病毒液作用于转基因细胞和对照细胞，分析了病毒在两种细胞中的滴度，病毒作用后细胞的生长曲线，细胞的凋亡情况。结果显示：病毒在对照细胞和转基因细胞中的滴度分别为10-6.4/0.1mL、10-5.6/0.1mL，差异显著；病毒作用后细胞生长曲线均呈现下降的趋势，但转基因细胞的生长曲线呈先升高后降低的趋势；非转基因细胞在72h的凋亡率高于转基因细胞的凋亡率，且差异极显著。这些结果说明IRF-1具有良好的抵抗BVDV作用的生物学功能。
(3)研究了IBRV对转基因细胞和对照细胞生物学特性的影响。使用MDBK细胞获得了病变情况良好的IBRV，然后利用500TCID50滴度的病毒液作用于转基因细胞和对照细胞，分析了病毒在两种细胞中的滴度，病毒作用后细胞的生长曲线，细胞的凋亡情况。结果显示：病毒在对照细胞和转基因细胞中的滴度分别为l0-6/0.1mL、10-5.8/0.1mL，差异不显著；病毒作用后细胞生长曲线均呈现下降的趋势，差异不显著；非转基因细胞在72h的凋亡率高于转基因细胞的凋亡率，且差异极显著。IBRV作用后转基因细胞与对照组形态无显著差异，而凋亡率显著降低，因此，本研究推测IRF-1对少量的IBRV具有抵抗作用。