目的：依据靶向阻断新血管生成可有效抑制肿瘤生长的原理，研究联合应用抗VEGF单抗与反应停两种抗血管生成药对荷H22肝癌小鼠肿瘤生长的抑制作用，探讨联合应用抗VEGF单抗与反应停作为一种新型抗肝癌方式的可行性。
　　 方法：1.小鼠肝癌移植瘤模型的建立：60只纯系清洁级KM小鼠，雌性，7～8周龄，体重18～22g。适应性饲养1d后，种植癌细胞，取小鼠左后肢大腿外侧为种植点，抽取0.2ml肿瘤细胞悬夜（约含4×106个细胞）注入种植点皮下。
　　 2.动物分组及肿瘤生长观察：肿瘤种植后1w，可观察到全部小鼠有明显皮下肿块形成，第10日选取其中肿瘤生长良好肿块直径约5mm的小鼠40只，将动物随机分为4组，即盐水组（对照组），抗体组，反应停组，抗体加反应停组，每组10只。用游标卡尺测量肿块长径（a）及横径（b），每日测量1次，肿瘤体积（V）=a×b2/2。
　　 3.药物给予：肿瘤接种后10d即分组当日开始给药，对照组每日每只经尾静脉注射生理盐水0.2ml；反应停组灌胃反应停400rag/（kg·d），灌胃容积为0.2ml/10g；抗体组每日每只经尾静脉注射抗VEGF单抗0.2ml；联合组每日每只灌胃反应停400mg/（kg·d），灌胃容积为0.2ml/10g，再经尾静脉注射抗VEGF单抗0.2ml。连续给药12d。
　　 4.瘤体称质量：抗体给药结束后继续观察肿瘤生长2w，于肿瘤种植后36d处死动物，称鼠重，取瘤组织，仔细分离肿块周边皮肤及非肿瘤组织，瘤体称质量并计算瘤质量抑制率，瘤质量抑制率（％）=（1-实验组平均瘤质量/对照组平均瘤质量）×100％。
　　 5.免疫组化微血管密度（MVD）测定：将肿瘤组织切成3mm厚片状，40g/L甲醛固定24h，脱水石蜡包埋，切片厚5μm.免疫组化SABC法：一抗为多克隆兔抗鼠CD34抗体，工作浓度1：100稀释.即用型High-SABC免疫组化试剂盒，具体操作按试剂盒说明进行，DAB染色，苏木素复染，树胶封片。选血管内皮细胞染色密集区于高倍镜（×200）下计数染色细胞，每片计数5个视野取平均值。
　　 6.免疫组化测VEGF表达：采用SABC法，组织切片脱蜡、水化后，用3％过氧化氢去除内源性酶，微波抗原修复，然后加入兔抗人VEGF抗体，DAB显色，苏木精复染，光镜观察结果。分别用已知阳性的肝癌组织切片作阳性对照，正常小鼠和兔血清及PBS代替-抗作阴性对照。细胞浆或核呈棕黄色颗粒状分布者为阳性染色。阳性染色细胞≤10％者为阴性表达，细胞阳性染色>10％者为阳性表达。
　　 7.统计学处理：各项计量资料指标均以均数±标准差（X±s）表示，应用SPSS13.0统计软件进行统计分析，应用重复测量数据方差分析处理肿瘤体积变化数据，多个独立样本非参数检验处理瘤质量抑制数据、MVD及VEGF表达率数据，P<0.05为差异有统计学意义。
　　 结果：1.抗VEGF单抗与反应停对肿瘤生长的抑制情况：种瘤后10d即动物分组时各组肿瘤体积无显著性差异，给药6d后，与对照组相比，各实验组肿瘤生长呈现减慢趋势，但各组差异不显著。种瘤后20d即给药后10d，抗体组、反应停组和联合组肿瘤体积显著小于对照组，且联合组<抗体组<反应停组，此显著性差异一直持续至动物处死（种瘤后36 d）。
　　 2.瘤质量抑制率：反应停组、抗体组和联合组在动物处死时的瘤质量抑制率分别为15.84％，29.26％和41.77％，均有明显抑制肿瘤质量增长作用，联合组瘤质量明显低于反应停组和抗体组。
　　 3.肿瘤组织微血管测定（MVD）：免疫组化法处理结果显示，各实验组MVD低于对照组，联合组较反应停组与抗体组MVD低，MVD在抗体组与反应停组之间差异无统计学意义。
　　 4.VEGF表达率测定：免疫组化法处理结果显示，各组VEGF表达率分别为：反应停组45％、抗体组35％、联合组25％，显著低于对照组80％。
　　 结论：本实验研究结果显示，虽然反应停与抗VEGF单抗两种药物抗血管生成作用基理不同，但在抗H22转移瘤新生血管生成上有协同作用，并且这两种药相对于肿瘤患者来说使用限制较少，易于普及，有望为临床提供一种新的肝癌治疗方式。