背景和目的肺癌是世界上发病率以及死亡率最高的恶性肿瘤之一,现代社会工业的发展越来越迅速,导致环境污染越来越严重;科技的发展,带动了医学的发展,也提高了人们的生活水平,使人类在健康和长寿方面较前得到明显提高,老龄人口的比重逐渐加大,因此,肺癌的发病人数呈逐年递增的趋势。据2013年资料统计,全世界每年肺癌死亡人数超过150万例,然而只有15%左右的肺癌患者诊断后存活超过5年,我国肺癌发病率每年增长26.9%,位居我国恶性肿瘤死亡原因的首位。在肺癌中,非小细胞肺癌(non small cell lung carcinoma,NSCLC)占总数的80%,严重影响患者生存时间和生存质量。近年来,在肿瘤的预防、诊断、治疗及发病机制等方面,人类进行了孜孜不倦的探索,新型治疗药物及新的治疗规范亦不断地出现,新的肿瘤治疗手段也不断出现,不同程度的延长了患者的生存期,然而肿瘤的转移和进展仍是不可避免的,肿瘤的死亡率仍呈不断增高之势。因此,如何准确判断患者的预后,提前采取干预措施,改善生存显得尤为重要。肺癌的预后影响因素十分复杂,目前认为,对患者生存预后最重要的因素是肿瘤在诊断时的分期,包括肿瘤大小、胸膜转移、区域淋巴结转移、远处转移等,然而根据目前的TNM分期准则,并不能解释相同分期的患者为何会出现不同的预后。近年来,随着分子生物学和遗传学的深入发展,站在分子生物学的视角,在新的分子标志和基因等方面有了突破性的发现,同时也发现了很多与肺癌预后本质相关的生物学的元素。但是事实上对判断肺癌预后的生物学标志没有统一的观点,仍然需要进一步的研究证实。材料与方法1材料来源收集2008.12-2010.1我院病理诊断为非小细胞肺癌并进行手术的肺癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织标本33对。2标本处理所有肺癌组织标本及配对的癌旁组织标本均置于无酶冻存管中,并于-80℃冰箱中保存,以供提取总m RNA和总蛋白。3实验方法3.1前期我们通过文献分析以及利用GWAS资料再挖掘,筛选出候选基因CD133、CD24、CD34、OCT4、SOX3、PLAGL2、CD176、SALL4、CD105、TAZ、KIT、ABCG2、ALDH1、NANOG、SOX2、TERT,其中CD133已得到验证。3.2 m RNA的提取及分析首先用Trizol法提取10对肿瘤组织与配对癌旁组织的总RNA,随后对提取的RNA进行反转录合成c DNA,最后对c DNA进行扩增。分析并筛选在肿瘤组织与配对癌旁组织中表达有差异的基因。3.3 m RNA的提取及分析再次在33对样本中验证所筛选的基因。用Trizol法提取33对肿瘤组织与配对癌旁组织的总RNA,随后对提取的RNA进行反转录合成c DNA,最后对c DNA扩增。再次筛选在肿瘤组织与配对癌旁组织中表达有差异的基因,进行统计学分析,了解其与临床病理参数的关系,通过随访,明确其与预后的相关性。3.4蛋白的提取及分析首先提取肿瘤组织与癌旁正常组织的总蛋白,采用蛋白印迹技术(Western blot)生物学实验技术法检测所筛选蛋白表达水平,然后分析蛋白表达量与临床病理参数的关系,结合随访数据,进一步分析其蛋白表达量与预后的相关性。4数据分析与统计针对相关的实验数据,运用SPSS 19.0软件进行统计学分析。运用t检验分析肿瘤组织与配对癌旁组织中各基因的m RNA相对表达量的差异,及western bolt定量分析蛋白表达,随访并进行生存分析,运用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.m RNA在组织中的表达在10对样本中,16个基因在肿瘤组织及配对癌旁组织中的相对定量分析结果:ABCG2,ALDH1,CD34,CD24,CD105,CD133,CD176,OCT4,PLAG2,SALL4,SOX3,TAZ的m RNA相对表达水平在肿瘤组织高于配对癌旁组织,NANOG,KIT,SOX2的m RNA相对表达水平在肿瘤组织低于配对癌旁组织,其中CD24 m RNA在肿瘤组织的相对表达量是配对癌旁组织中3.15倍,P=0.002。2.CD24 m RNA在组织中的表达及与临床病理特征的关系2.1在33对样本中,CD24 m RNA在肿瘤组织中的相对表达量显著升高,为配对癌旁组织的2.62倍,P=0.0019。2.2 CD24 m RNA的相对表达量与年龄无相关性,P=0.51;在不同性别、病理类型、分化程度、分期及有无淋巴结转移中的相对表达量存在差异,但均均无统计学差异,P值分别为0.56、0.16、0.99、0.76、0.55。3.CD24 m RNA相对表达量与预后的关系3.1 CD24 m RNA相对表达量与患者无进展生存期(PFS)呈线性负相关,Pearson相关系数r=-0.47,R2=0.221,p=0.0058。3.2 CD24 m RNA相对表达量与患者总生存期(OS)呈线性负相关,Pearson相关系数r=-0.4653,R2=0.216,P=0.006。4.CD24蛋白在组织中的表达及与临床病理参数的关系4.1 CD24蛋白在肿瘤组织中的表达量是配对癌旁组织的中2.46倍,p=0.0034。4.2 CD24蛋白表达量与年龄无相关性,P=0.37;CD24蛋白表达量在不同的病理类型、不同的性别、不同的分期、不同的分化程度及有无淋巴结转移中无统计学差异,P值分别为0.16、0.65、0.74、0.58、0.26。5.CD24蛋白表达量与预后的关系5.1 CD24蛋白表达量与患者PFS呈线性负相关,Pearson相关系数r=-0.36,总体相关系数95%置信区间为(-0.63,0.02),P=0.04。5.2 CD24蛋白表达量与患者OS呈线性负相关,Pearson相关系数r=-0.3937,总体相关系数95%置信区间为(-0.65,-0.06),P=0.02。5.3 CD24蛋白高表达组中位生存期为46.43个月,中表达组中位生存期为50.83个月、低表达组中位生存期69.67月。P=0.0005。结论1 CD24在肿瘤组织中过表达,且与患者的PFS和OS呈线性负相关。CD24蛋白低表达可延长患者生存期。2 CD24可能作为肺癌的生物标志物,用于判断患者的预后。