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目的:宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一,其中宫颈腺癌在宫颈癌中的发病率仅次于鳞状细胞癌,且其易发生早期浸润、转移,预后差。研究表明,肿瘤的侵袭、迁移与癌细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)密切相关。微小核苷酸(microRNA,miRNA)中的miR-200家族是最早发现与上皮间质转化相关的miRNA,在多种肿瘤中通过调控EMT影响肿瘤的发生发展。有研究发现miR-200a在宫颈癌中低表达可能致使上皮间质转化相关蛋白钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)表达降低,引起EMT形成并诱发肿瘤转移,使宫颈癌患者预后更差,但具体调控机制尚未阐明。本实验拟通过上调miR-200a来研究过表达miR-200a对宫颈腺癌Hela细胞上皮间质转化的影响,以及对宫颈腺癌Hela细胞的增殖、迁移及侵袭能力的影响。
方法:体外培养人宫颈腺癌Hela细胞,并将细胞分为实验组和阴性对照组,实验组细胞转染mimic/miR-200a-3p,阴性对照组转染nc/miR-200a-3p。1、利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测人子宫颈腺癌Hela细胞转染mimic/miR-200a-3p24小时后的转染率;并通过相同方法检测人子宫颈腺癌Hela细胞中过表达miR-200a后E-cadherin及Vimentin的表达量的变化;2、利用细胞划痕实验检测过表达miR-200a对人子宫颈腺癌Hela细胞迁移运动的影响;3、利用Transwell小室侵袭实验检测过表达miR-200a对人子宫颈腺癌Hela细胞侵袭能力的影响;4、利用CCK-8实验测定过表达miR-200a对人子宫颈腺癌Hela细胞增殖能力的影响。
结果:1、根据实时荧光定量PCR检测获得的Ct值进行相对定量计算,以2-△△Ct作为统计量,实验组为(1626.68±160.45),对照组为1,实验组Hela细胞中的miR-200a显著升高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);同法计算,实验组的E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相对表达值(2-△△Ct)分别为(1.52±0.04),(0.54±0.02),对照组的E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相对表达值(2-△△Ct)均为1.00;实验组与对照组相比,E-cadherin表达上调、Vimentin表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);2、根据划痕实验结果测量计算后得知,对照组48小时划痕愈合率为44%,实验组48小时划痕愈合率为25%,实验组较对照组细胞的迁移能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05);3、Transwell实验中,显微镜下计数,实验组的细胞穿膜数为(36.67±4.16),对照组的细胞穿膜数为(75.00±4.58),两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);4、CCK-8实验中,实验组在24、48及72小时的吸收光度值均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.过表达miR-200a可能抑制人子宫颈腺癌Hela细胞发生上皮间质转化,并可对人宫颈腺癌Hela细胞的增殖、迁移以及侵袭能力起抑制作用;2.过表达miR-200a可能通过调控EMT从而影响宫颈腺癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
方法:体外培养人宫颈腺癌Hela细胞,并将细胞分为实验组和阴性对照组,实验组细胞转染mimic/miR-200a-3p,阴性对照组转染nc/miR-200a-3p。1、利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测人子宫颈腺癌Hela细胞转染mimic/miR-200a-3p24小时后的转染率;并通过相同方法检测人子宫颈腺癌Hela细胞中过表达miR-200a后E-cadherin及Vimentin的表达量的变化;2、利用细胞划痕实验检测过表达miR-200a对人子宫颈腺癌Hela细胞迁移运动的影响;3、利用Transwell小室侵袭实验检测过表达miR-200a对人子宫颈腺癌Hela细胞侵袭能力的影响;4、利用CCK-8实验测定过表达miR-200a对人子宫颈腺癌Hela细胞增殖能力的影响。
结果:1、根据实时荧光定量PCR检测获得的Ct值进行相对定量计算,以2-△△Ct作为统计量,实验组为(1626.68±160.45),对照组为1,实验组Hela细胞中的miR-200a显著升高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);同法计算,实验组的E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相对表达值(2-△△Ct)分别为(1.52±0.04),(0.54±0.02),对照组的E-cadherin和Vimentin蛋白表达的相对表达值(2-△△Ct)均为1.00;实验组与对照组相比,E-cadherin表达上调、Vimentin表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);2、根据划痕实验结果测量计算后得知,对照组48小时划痕愈合率为44%,实验组48小时划痕愈合率为25%,实验组较对照组细胞的迁移能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05);3、Transwell实验中,显微镜下计数,实验组的细胞穿膜数为(36.67±4.16),对照组的细胞穿膜数为(75.00±4.58),两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);4、CCK-8实验中,实验组在24、48及72小时的吸收光度值均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.过表达miR-200a可能抑制人子宫颈腺癌Hela细胞发生上皮间质转化,并可对人宫颈腺癌Hela细胞的增殖、迁移以及侵袭能力起抑制作用;2.过表达miR-200a可能通过调控EMT从而影响宫颈腺癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力。