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在氧化应激条件下,生物体内一氧化氮自由基(·NO)和超氧根阴离子自由基(O2·￣)会结合成一种具有强氧化、硝化能力的细胞毒性物质—过氧亚硝酸根(ONOO￣)。生理条件下它能够质子化为过氧亚硝酸(ONOOH),穿过细胞膜,达到·NO和·OH等自由基达不到的位置,损伤生物靶分子。ONOO￣可氧化细胞膜脂、硝化蛋白质,损伤DNA等生物大分子,影响细胞信号传导通路和能量代谢,导致细胞凋亡,最终引起一系列疾病如风湿性关节炎、败血症、帕金森症和癌症等的发生。而人体内缺乏特异性清除过氧亚硝酸根的酶,因此开发具有抗ONOO￣能力、低毒的清除剂对于人体健康具有十分重要的意义。天然产物种类丰富,是药物研发的重要原料来源,近几年发现多种天然产物具有抑制ONOO￣损伤的能力,但是由于天然产物种类繁多,并未建立对其抑制效果的统一评价体系。前期研究发现松树皮、迷迭香和紫锥菊粗提物对过氧亚硝酸根具有较好的清除效果。本研究进一步从中分离得原花青素、迷迭香酸和菊苣酸,以ONOO￣介导酪氨酸硝化(3-硝基酪氨酸生成量)、DNA链断裂以及ONOO￣均裂生成的自由基强度为指标,以维生素C为参照,借助高效液相色谱技术、电泳技术、电子自旋共振及自由基自旋捕获技术探究了三种成分的抑制效果。研究发现基于自由基理论,三种天然产物对·OH和·NO2介导的损伤表现出了不同的抑制效果。原花青素、迷迭香酸、菊苣酸及维生素C抑制ONOO￣介导酪氨酸硝化IC50分别为75.3μM、64.5μM、54.9μM和346.7μM,抑制效果:菊苣酸>迷迭香酸>原花青素>维生素C;抑制DNA链断裂IC50分别为10.65μM、10.03μM、9.39μM和26.90μM,抑制能力:菊苣酸>迷迭香酸>原花青素>维生素C,但在高浓度范围内抑制效果:原花青素>菊苣酸>迷迭香酸>维生素C,可能多聚体原花青素通过氢键能够与DNA分子发生可逆性结合,形成的复合物能增强DNA稳定性;清除ONOO￣均裂生成的·OH自由基IC50分别为1.0005μg/mg、0.9939μg/m L、0.8850μg/m L和1.3346μg/mL,捕获能力菊苣酸>迷迭香酸>原花青素>维生素C。结合各天然产物结构及抑制效果发现·NO2的硝化作用在ONOO￣介导的DNA链断裂过程中起主要作用;维生素C清除·OH的能力较强,清除·NO2能力较弱。原花青素、迷迭香酸、菊苣酸分子结构中含有的邻酚羟基是其强清除能力的分子基础。酚羟基与自由基反应后释放出H+,与·OH和·NO2及其氧化产物结合,形成较稳定的半醌式结构自由基,从而阻断自由基反应。此外分子内存在的氢键、C=C、羰基及p-π共轭体系通过稳定自由基中间体,延伸共轭体系及促使电子云分散等作用增强其ONOO￣的清除能力。三种天然产物清除ONOO￣机理可能为:捕获ONOO￣均裂生成的自由基,阻断自由基链式反应;络合相关金属离子,抑制其催化作用。本试验对原花青素、菊苣酸、迷迭香酸抑制过氧亚硝酸根损伤进行了探究,并对其机理进行了猜测,期望能形成初步的抑制效果评价体系,为过氧亚硝酸根的抑制剂开发提供一定的理论支持。