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目的:
观察TLR9(Toll-like-receptor9)在胰腺癌细胞株(PANC-1)中的表达情况,并研究TLR9受体激动剂CPG-ODN1826对PANC-1细胞增殖、迁移及凋亡的影响。
方法:
采用免疫荧光及westernblot法对PANC-1细胞中的TLR9进行检测。将样本分实验组及对照组,实验组PANC-1细胞中加入TLR9受体激动剂CPG-ODN1826,对照组单独培养PANC-1细胞。采用MTT、结晶紫、琼脂糖克隆成形实验对实验组及对照组PANC-1细胞增殖能力进行检测,并采用westernblot法测磷酸化细胞外调节蛋白激酶(P-ERK)和磷酸化c-jun氨基末端激酶(P-JNK)的表达;采用划痕实验,迁移实验对实验组及对照组PANC-1细胞的迁移能力进行检测,并利用westernblot法测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达;采用流式细胞术对照组及实验组PANC-1细胞凋亡能力进行检测,并采用PCR及westernblot法测实验组及对照组凋亡相关蛋白NFκB的表达情况。
结果:
PANC-1细胞中有TLR9的表达。MTT、结晶紫、琼脂糖克隆成形实验表明实验组PANC-1细胞的增殖能力强于对照组(P<0.05),其增殖相关蛋白P-AKT,P-JNK的表达也高于对照组。划痕实验,迁移实验说明实验组PANC-1细胞的迁移能力强于对照组(P<0.05),其迁移相关蛋白MMP-2,MMP-9的表达也高于对照组。流式细胞术表明对照组PANC-1细胞晚期凋亡率高于实验组(P<0.05)。PCR及westernblot法证明实验组凋亡相关蛋白NFκB表达量多于对照组。
结论:
通过TLR9激动剂CPG-ODN1826刺激胰腺癌细胞中TLR9表达,可以促进胰腺癌细胞的增殖及迁移,并抑制其凋亡。这一结果提示,TLR9在胰腺癌的发生发展起重要作用,并且通过对TLR9受体的调控,能够直接抑制胰腺肿瘤的生长。