【摘 要】
:
小麦经常受到干旱、高温等逆境胁迫,对其产量造成威胁。分子生物学手段和基因工程的运用为改良小麦抗逆性育种提供了有效的方法。木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶(Xyloglucan endoglycosyltransferase/hydrolase,XET/XEH,XTH)属于糖基水解酶16家族,该类基因有助于提高植物的耐旱性,是植物耐旱基因的候选基因。本研究克隆小麦Ta XTH-7A基因,并对其结构、表达
【基金项目】
:
国家自然基金(编号:31871611); 陕西省重点研发计划(编号:2018NY-051);
论文部分内容阅读
小麦经常受到干旱、高温等逆境胁迫,对其产量造成威胁。分子生物学手段和基因工程的运用为改良小麦抗逆性育种提供了有效的方法。木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶(Xyloglucan endoglycosyltransferase/hydrolase,XET/XEH,XTH)属于糖基水解酶16家族,该类基因有助于提高植物的耐旱性,是植物耐旱基因的候选基因。本研究克隆小麦Ta XTH-7A基因,并对其结构、表达和功能进行了研究,以期为小麦抗逆分子育种提供候选基因。主要研究结果如下:1.运用PCR方法克隆到小麦Ta XTH-7A基因,该基因含有3个外显子和2个内含子,编码区(CDS)全长870 bp,编码290个氨基酸。编码蛋白的序列分析发现,该蛋白具有XET特有的保守位点;还含有信号肽和跨膜结构域,可能属于分泌蛋白。2.将Ta XTH-7A基因的CDS构建到原核表达载体p ColdTMTF上,利用IPTG在低温条件下诱导重组蛋白的表达,通过SDS-PAGE电泳及Western blot技术分析发现重组蛋白在原核细胞中成功表达。用比色法对重组蛋白进行XET酶活性的测定,发现该重组蛋白确实具有转移木葡聚糖糖基的作用,且在p H5.5时活性最大,由此证明Ta XTH-7A确属木葡聚糖内糖基转移酶。3.通过农杆菌注射烟草的方法对该基因的表达产物进行亚细胞定位,发现Ta XTH-7A蛋白主要存在于在细胞质、细胞膜和质外体,Ta XTH-7A蛋白在质外体的存在表明,该蛋白确实属于分泌蛋白。将小麦置于不同胁迫条件下研究Ta XTH-7A的表达模式分析发现,该基因在干旱、高盐(Na Cl)、ABA、SA等条件下均上调表达,在高温和低温条件下下调表达。利用Ta XTH-7A的启动子转化拟南芥,GUS染色发现该基因主要在根和花药中表达。4.构建35S:Ta XTH-7A-p Ca MBIA1302表达载体,利用农杆菌介导法侵染拟南芥,获得T3代转基因株系。通过转基因拟南芥和野生型的对比,进行Ta XTH-7A的功能分析,结果表明:正常生长条件下,转基因拟南芥的萌发速率加快、主根更长、根系平均直径增加;进一步分析还发现,转基因拟南芥种子的内源激素含量发生变化、根系细胞体积增大等,这些可能是导致转基因拟南芥萌发速率和根系生长加快的原因。在PEG6000和甘露醇(mannitol)模拟干旱处理条件下,转基因拟南芥的萌发速率较快,侧根数显著增多;土壤干旱处理条件下,转基因拟南芥的耐旱性也显著高于野生型;相关生理指标的测定发现,Ta XTH-7A基因提高了转基因拟南芥细胞的抗氧化能力,降低了膜质的过氧化程度,维持了细胞膜的完整性和正常功能,这可能是转基因拟南芥耐旱性提高的生理原因。另外,小麦的根长与Ta XTH-7A基因的表达量也呈正相关,小麦根长的增加有利于耐旱。上述拟南芥和小麦中的研究结果一致表明,Ta XTH-7A基因有助于提高植物耐旱性。
其他文献
白鲜碱(Dictamnine)是一种线型呋喃喹啉类生物碱,该类化合物不仅在自然界分布广泛,而且具有抗癌、降血压、抗寄生虫、抗血小板聚集等多种药理活性及优良的抗菌活性。2,4-二取代喹啉既是合成白鲜碱的重要中间体,也是畅销抗菌、抗哮喘、抗肿瘤药物和活性天然产物中常见的结构单元,丰富的生物活性使其在医药、农药、染料等领域得到广泛使用。为了筛选出抗菌活性优异的喹啉类生物碱,本研究设计并合成了一系列2,4
在遭受昆虫或病原体侵害时,植物器官能够通过调控生理代谢来进行直接的防御反应。这些生理代谢产物往往会富集在侵染组织处形成显色病斑。‘丰花’海棠(Malus‘profusion’)叶片被海棠锈病(山田胶锈菌)侵染后,会在病斑周围富集大量的花青素,形成明显的红色病斑。目前对锈菌胁迫下海棠叶片染病组织花青素形成的分子机制尚不清楚。本研究通过前期对海棠锈病侵染特征观察及冬孢子萌发培养,探明了红色病斑的发生时
干旱导致的土地荒漠化加剧了自然灾害,减少了适宜植物生存的面积。柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)作为广泛分布于我国干旱半干旱地区的灌木,因其耐旱能力强成为防风固沙优势物种,但研究多为其生理特征,对其抗旱机制的研究特别是miRNA调控的抗旱功能研究鲜见。本研究以实验室前期发现的响应水分胁迫的柠条CkmiR2119为研究对象,通过qPCR确定了干旱加剧条件下其在柠条茎中的表达趋势,
本研究以陕北黄土丘陵区猪毛蒿、铁杆蒿、达乌里胡枝子、白羊草植物群落为研究对象。通过野外调查与室内分析,探究该地区不同生长年限、不同坡向典型植物群落物种多样性与生态位特征以及影响因素;结合物种多样性、群落结构、土壤因素分析影响群落稳定性的主要因子。探讨该地区典型植物群落发展的动态特征及其对环境的适应性,为该地区植被恢复与管理提供科学依据。主要结论如下:1.陕北黄土丘陵区典型植物群落物种多样性研究对陕
膳食纤维被称为第七大营养元素,其对预防和治疗高血压、高血脂、高血糖、糖尿病、脂肪肝、肥胖、细胞癌变、便秘等疾病有重要作用。然而我国有95%左右的人群日均摄入量不足健康要求的一半。榨果汁、酿酒和有效成分提取之后产生的果渣含有丰富的膳食纤维,但是其大量被废弃,仅有少量被作为饲料和肥料利用。因此本研究以中药提取后沙棘果渣和雪莲果酵素液果渣为原料,提取其膳食纤维、分析其理化性能;借鉴中药配方,研制沙棘膳食
植物源农药往往表现出良好的环境相容性,且具有低毒、作用靶标特异的特点。目前,与其他农药产品相比,植物源除草剂的研发进展相对缓慢。随着对农药安全性、环境保护和杂草防除要求的不断提高,有必要加强该类植物源农药产品的研发。西北农林科技大学无公害农药研究服务中心通过对西北地区上千种植物的除草活性进行筛选,发现大花六道木[Abelia×grandiflora(Andre)Rehd.]等几种植物对反枝苋、稗草
在癌症治疗过程中,化疗一直面临药物对正常细胞的毒副作用和药物效率低下两大难题。而纳米载药体系的出现,为解决这两大难题提供了一个新途径。利用肿瘤组织与正常组织微环境的差异,构建具有刺激响应性的纳米载药体系可以实现抗肿瘤药物在癌细胞内的可控释放,在增强药物的稳定性、延长药物作用时间、降低药物毒副作用、提升药物治疗效率等方面具有显著的优势。然而肿瘤细胞内环境相对复杂,单一刺激响应纳米载药体系往往难以实现
棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)是重要的世界性农业害虫,取食多种寄主植物,为了克服植物防御,进化形成了尖端的防御系统(解毒酶系)进行反防御。由于长期不合理使用农药,棉铃虫的抗药性迅速发展。Keap1/Cnc C-ARE信号通路是昆虫抗氧化以及抵抗外来损伤、参与代谢解毒的重要通路之一。开展该通路相关基因研究,对于深入研究害虫抗性机制,理解昆虫的进化具有重要的意义。本论文
类固醇激素20-羟基蜕皮酮(20E)在昆虫的发育变态、生殖和滞育等生命活动过程起着重要的调节作用。蜕皮激素受体EcR和超气门蛋白USP是20E的作用靶标,二者形成异源二聚体相互作用,在20E的信号传导中发挥着重要作用。研究发现,EcR最多可编码A、B1和B2三种蛋白亚型,USP可编码A和B两种蛋白亚型;不同亚型的EcR和USP在昆虫生命活动中的表达模式、结合方式和功能不同。麦红吸浆虫Sitodip
斑蝥素作为一种动物(昆虫)源次生代谢产物对多种害虫具有毒杀作用且作用方式多样,对部分非靶标生物毒害低,因此作为生物源杀虫剂具有着十分广泛的利用价值及应用前景。美洲大蠊是常见的卫生害虫,繁殖能力旺盛,分布广泛且防治困难。本文以本团队提取或研发的43种斑蝥素类化合物作为受试化合物,借助生物活性测定的方法,探究其对美洲大蠊的毒杀作用;筛选出生物活性较好的3种化合物并测定了它们对美洲大蠊体内3种解毒酶的影