杨树是世界上中纬度地区广泛栽培的重要用材树种,在造纸方面也有着极其重要的作用。木质素是地球上数量仅次于纤维素的有机物,在植物生长和发育中发挥重要作用,但它却是形成造纸污染的主要来源。利用基因工程手段,在分子水平调节木质素的生物合成,降低木质素的含量或改变其组分以培育适合造纸的植物原料树种具有很大的应用价值和环保效益。本研究以南林95杨叶片为植物材料,利用RNAi技术,主要围绕木质素合成两种相关酶4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)、肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)的基因,构建了4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)干涉表达载体pBI121+2F,开展了农杆菌介导的杨树遗传转化,并对转化植株进行了筛选,同时对转CCR基因的南林95杨进行了分子检测和木质素含量检测,取得如下进展:1、采用改良的Trizol法提取南林95杨的总RNA,利用RT-PCR技术克隆得到4CL基因的部分序列(204bp),以pUCCRNAi与pBI121载体作为桥梁载体,通过酶切、纯化、连接、转化等一系列基因工程操作方法构建了含CaMV35S组成型启动子和卡那霉素筛选基因的RNA干涉表达载体pBI121+2F,利用直接导入法将构建的干涉载体导入农杆菌LBA4404中。2、用已建立的叶盘法农杆菌遗传转化体系,将pBI121+2F干涉表达载体导入南林95杨中,获得了经抗Kan筛选的含RNA干涉表达载体的转基因植株。3、将已获得的移栽到大田半年的含pBI121+CCR干涉表达载体的转基因杨树植株进行分子检测,表明目的基因已经整合到杨树基因组DNA上,且转基因植株的形态和生长发育未见异常,对转基因植株茎干横截面进行组织化学染色发现木质素含量明显减少,测定Klason木质素及综纤维素含量的结果显示:转基因植株Klason木质素含量与对照相比平均降低了9.7%,综纤维素含量与对照相比平均增加了3.14%。对转基因植株的纤维形态进行测定发现纤维长宽比明显增加。结果均表明转基因植株更有利于造纸。综上所述,本文已成功的构建了RNA干涉表达载体pBI121+2F,并对其进行了遗传转化,培育出速生、优质的杨树新品种;对含有pBI121+CCR干涉表达载体的转基因杨树植株进行了系统的检测,为进一步深入了解木质素生物合成提供了研究材料,也为其他树种的木质素基因工程改良奠定理论基础。