【摘 要】
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目的:探索改良兔眼B16F10和OCM-1脉络膜黑色素瘤原位肿瘤模型的建立方法,及脉络膜肿瘤的成瘤影响因素;观察超声造影在兔眼脉络膜黑色素瘤的显像特点;探索超声造影量化分析脉络膜黑色素瘤血液循环特征;分析和比较超声造影与吲哚菁绿血管造影（ICGA）在兔眼脉络膜黑色素瘤显像中的特点;建立评估脉络膜黑色素瘤内部微循环状况的立体评估模式。方法:体外收集和培养黑色素瘤细胞株B16F10和人脉络膜黑色素瘤细
【基金项目】
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市科委一般项目（15411952700）；
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目的:探索改良兔眼B16F10和OCM-1脉络膜黑色素瘤原位肿瘤模型的建立方法,及脉络膜肿瘤的成瘤影响因素;观察超声造影在兔眼脉络膜黑色素瘤的显像特点;探索超声造影量化分析脉络膜黑色素瘤血液循环特征;分析和比较超声造影与吲哚菁绿血管造影（ICGA）在兔眼脉络膜黑色素瘤显像中的特点;建立评估脉络膜黑色素瘤内部微循环状况的立体评估模式。方法:体外收集和培养黑色素瘤细胞株B16F10和人脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1后,配成1 x 107/100ul的肿瘤细胞悬液,并分别种植于C57BL小鼠和BALB/C裸鼠皮下。待肿瘤直径1-1.5cm时,制作大小均匀的肿瘤组织碎片。新西兰白兔注射环孢素A 15mg/kg免疫抑制,通过手术制作巩膜切口将肿瘤组织碎片植入两组各12只兔右眼的脉络膜上腔,左眼植入结膜组织作对照。4周后眼底照像、ICGA确认肿瘤模型完成,采集兔眼普通超声、多普勒彩色超声、超声造影图像并自动记录,使用Sono Liver分析肿瘤内血流充盈曲线,达峰时间、峰值强度、平均渡越时间、曲线下面积、上升支斜率、下降支斜率。肿瘤种植眼摘除后,常规石蜡切片进行HE、PAS、CD31免疫组织化学染色,观察肿瘤内部血管结构和形态,并分析肿瘤血管微循环结构与影像学表现相关性。结果:C57BL小鼠和BALB/C裸鼠皮下相应种植肿瘤B16F10和OCM-1成瘤率为100%。兔眼B16F10脉络膜黑色素瘤成瘤率为100%（10/10）,OCM-1脉络膜黑色素瘤成瘤率为60%（6/10）。B16F10肿瘤持续膨胀性生长,透过瞳孔有肉眼可见黑色眼底反光;OCM-1肿瘤组织从种植部位眼球壁隆起,生长较B16F10缓慢。ICGA下,B16F10肿瘤表面环形、不规则缠绕、迂曲粗大血管,肿瘤内色素性荧光遮蔽明明显;OCM-1肿瘤表面及浅层粗大、平行分布血管呈高荧光,血管支之间较细的交通支呈现网格状分布,后期可见荧光渗漏。灰阶超声测量B16F10肿瘤最大切面两条垂直径线平均长度为0.998±0.320cm和0.830±0.225cm,OCM-1肿瘤为0.749±0.133cm和0.465±0.131cm。超声造影定性分析,B16F10和OCM-1肿瘤内血流信号非匀质,充盈模式为由基底部向肿瘤内部充盈、由肿瘤周边部向肿瘤内部充盈、基底部及肿瘤内部中心向周边组织充盈等,伴局部点片状充盈缺损。定量分析,B16F10肿瘤与正常眼球壁组织比较,峰值强度、曲线下面积、下降支斜率较大（p＜0.05）,微循环充盈模式呈“正常速度充盈,快速消退,血流量大”。OCM-1肿瘤与正常眼球壁组织比较,峰值强度、曲线下面积、上升时间、达峰时间、平均渡越时间、上升支和下降支斜率较大（p＜0.05）,微循环呈“快速充盈,快速消退,血流量大”模式。比较发现OCM-1肿瘤曲线下面积较B16F10小,平均渡越时间、上升时间、达峰时间较B16F10小。病理切片染色下,B16F10肿瘤内可见大片坏死组织,肿瘤细胞为含有大量色素颗粒的黑色素细胞呈岛样分布,由细胞岛中央血管供应血液;OCM-1肿瘤呈现大量PAS染色阳性的环状、网格状结构——血管拟态,“背靠背”排列,可见到部分形成血管腔。结论:通过巩膜切口植入肿瘤组织碎片是一种操作器械要求低、成瘤率高的兔眼脉络膜黑色素瘤模型建立方法,兔眼OCM-1脉络膜黑色素瘤可作为实验研究中动物模型。ICGA可以从眼内发现肿瘤内不同的平面血管形态,超声造影可以定性显示肿瘤矢状面微循环的多种充盈模式,也可以定量分析充盈曲线,并且与肿瘤病理相关,二者结合可以为肿瘤内微循环模式的立体评估,及肿瘤诊断和预后判断提供更精确的信息。
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