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背景:慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis,CAG）在我国发病率逐渐低龄化,成为目前公认的难治性疾病之一,并且属于胃癌的前期疾病,如果不加以控制,将会发展为胃癌。西医治疗CAG并没有明确的特效药,常为对症治疗缓解症状。中医药治疗CAG疗效较好,因此开展中医药对CAG的防治具有重要的临床意义。本课题组前期预实验研究发现CAG大鼠模型中Shh的表达下调,益气活血代表药黄芪三七能促进Shh的表达上调。由此推测益气活血法可能通过促进Shh的表达上调,减少胃黏膜细胞的凋亡,抑制胃黏膜腺体萎缩,发挥对胃黏膜的保护作用。因此,本研究拟通过黄芪、三七对大鼠萎缩性胃炎Hedgehog信号通路调控的影响,明确益气活血法治疗CAG的效果及主要单体成分干预的分子机制,为临床应用提供科学依据。目的:研究黄芪、三七对大鼠萎缩性胃炎细胞凋亡及Hedgehog信号通路的调控机制,阐明益气活血法治疗CAG的分子机制。探讨黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对萎缩性胃炎大鼠Hedgehog信号通路调控的影响。方法:实验一:分别采用幽门弹簧植入术配合高盐热淀粉糊灌胃法建立萎缩性胃炎大鼠模型和MNNG负荷多因素建立萎缩性胃炎大鼠模型,比较两种模型之间的病理情况、血清胃泌素水平、血清胃蛋白酶原水平,评价两种模型的特点。实验二:以幽门弹簧植入术建立CAG大鼠模型,TUNEL法评价胃黏膜细胞凋亡指数,免疫组化法评价PCNA表达情况,液相芯片法评价fas/fasL、EGF、TGF表达情况,以探讨黄芪、三七对萎缩性胃炎大鼠细胞凋亡及增殖的作用机制。实验三:以幽门弹簧植入术配合高盐热糊灌胃法制备萎缩性胃炎大鼠模型,检测shh、ptch、Gli1/2/3基因和蛋白的表达,量子点介导的免疫荧光检测Smo、SuFu、CyclinD1的蛋白强度。以探讨黄芪、三七对幽门弹簧植入术诱导的CAG大鼠模型hedgehog信号通路的调控机制。实验四:以MNNG负荷多因素法建立萎缩性胃炎大鼠模型,检测shh、ptch、Gli1/2/3基因和蛋白的表达,免疫荧光检测Smo、SuFu、CyclinD1的蛋白表达,并比较荧光强度。以探讨黄芪、三七对MNNG诱导的CAG大鼠hedgehog信号通路的调控机制。实验五:以幽门弹簧植入术配合高盐热糊灌胃法制备萎缩性胃炎大鼠模型,评价胃黏膜病理情况,检测shh、ptch、Gli1/2/3基因和蛋白的表达,免疫组化法检测smo蛋白表达,量子点介导的免疫荧光检测SuFu、CyclinD1的蛋白强度。以探讨黄芪甲苷、人参皂苷Rg1对CAG大鼠hedgehog信号通路的调控机制。结果:1幽门弹簧植入术配合高盐热淀粉糊灌胃法建立萎缩性胃炎大鼠模型病理多表现黏膜固有层腺体减少,炎性细胞浸润,淋巴滤泡形成,MNNG负荷多因素法建立萎缩性胃炎大鼠模型病理多表现为黏膜固有层腺体减少,伴肠上皮化生,少数异型增生。2种模型均伴有血清胃泌素水平降低（P<0.05）,MNNG诱导的CAG模型血清PGⅠ/PGⅡ水平较空白组降低（P<0.01）,幽门弹簧植入术诱导的CAG模型血清PG Ⅰ/PGⅡ无统计学差异。2幽门弹簧植入术制备的萎缩性胃炎模型大鼠凋亡指数较空白组显著降低（P<0.01）,PCNA表达增加（P<0.01）,与空白组比较,模型组fas及fasL均显著升高,模型组血清TGF-β水平显著降低,EGF水平无明显统计学意义。较模型组比较,各给药组均能降低血清fas表达（P<0.05,P<0.01）,黄芪组及黄芪三七组能显著降低fasL水平（P<0.05）。黄芪三七组可以升高血清TGF-β水平（P<0.05）。3幽门弹簧植入术诱导的萎缩性胃炎大鼠模型,Shh、Ptch、Gli-1蛋白及基因表达均较空白组显著降低（P<0.05,P<0.01）。免疫荧光检测Smo、CyclinD1蛋白表达下降（P<0.01）,SUFU表达升高（P<0.01）。较模型组比较,各给药组均能不同程度的改善蛋白及基因的表达情况,以激动剂Purmorphamine作用最为显著,中药组中黄芪组及黄芪三七组疗效更好（P<0.05,P<0.01）。4 MNNG负荷多因素建立萎缩性胃炎大鼠模型,与空白组比较,Shh、Ptch、Smo和CyclinD1 蛋白表达均降低（P<0.05,P<0.01）,Gli-2、Gli-3 及SUFU表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,Gli-1基因表达无明显统计学意义;与模型组比较,各给药组能不同程度的改善各因子蛋白及基因表达,purmorphamine组最为显著,中药组中三七组及黄芪三七组作用明显（P<0.05,P<0.01）。5幽门弹簧植入术配合高盐热淀粉糊灌胃法制备萎缩性胃炎大鼠模型,人参皂苷Rg1低剂量组和高剂量组可升高Shh、Ptch的表达,降低smo表达,其中以高剂量组改变明显（P<0.05,P<0.01）;黄芪甲苷高剂量组显著改善Gli-1的表达,及升高CyclinD1的蛋白表达（P<0.05）。结论:1、幽门弹簧植入术配合高盐热淀粉糊灌胃法制备的CAG模型病理均有固有腺体减少,幽门弹簧植入术诱导的CAG模型更符合萎缩性胃炎的病理变化,MNNG诱导的CAG大鼠模型更趋向于萎缩性胃炎癌前病变的病理变化。2、幽门弹簧植入术制备的CAG大鼠模型中,细胞凋亡与增殖同时出现,凋亡大于增殖,中药黄芪和三七对细胞凋亡及增殖均有改善作用,其中,黄芪三七合用对凋亡作用明显,黄芪单用对细胞增殖抑制作用显著。3、黄芪、三七及其配伍能激活幽门弹簧植入术制备的CAG大鼠hedgehog信号,不同程度的改善通路上各因子表达,对于上游因子Shh、Ptch作用显著。其中黄芪组在改善黏膜萎缩及激活hedgehog通路方面疗效优于其他中药组。4、MNNG诱导的CAG模型中,黄芪、三七及其配伍能改善CAG大鼠胃黏膜萎缩状况,激活hedgehog信号,起到对CAG大鼠胃黏膜的保护作用。其中三七组疗效优于其余中药组。5、黄芪甲苷、人参皂苷Rg1可改善CAG大鼠胃黏膜病理,并可调控hedgehog信号通路关键因子,激活hedgehog信号,保护胃黏膜,总疗效不如中药黄芪和三七显著。