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目的:探讨卒中瘀阻脑络证候的形成机理,研究丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡的保护作用及可能的作用途径。
方法:将SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、丹龙醒脑片组和尼莫地平组4 组,灌胃给药,从造模前3 d开始,直到造模后2 d,丹龙醒脑片组给药剂量为4 g/kg,尼莫地平组给药剂量为10.8 mg/kg,假手术组和模型组每天灌胃等体积蒸馏水。采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型。运用生物化学、RIA、免疫组织化学和图象处理技术,观察大鼠脑缺血再灌注损伤后血液流变学、血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F11α(6-keto-PGF1α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Ca2+;海马区神经元凋亡指数、死亡受体通路相关受体/配体Fas/FasL、肿瘤坏死因子(TNF-α)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-8(caspase8)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase3)含量的变化,以及丹龙腥脑片对上述指标的影响。
结果:(1)丹龙醒脑片可显著降低全血粘度(高切、低切),血浆粘度,红细胞压积及纤维蛋白原浓度;降低血浆TXB2的含量、提高6-keto-PGF1α的含量;提高脑组织SOD活性,显著降低脑组织MDA、Ca2+的含量。(2)丹龙醒脑片可显著降低大鼠脑缺血再灌注后海马区神经元凋亡细胞数量。(3)丹龙醒脑片可明显抑制脑缺血再灌注损伤大鼠海马区Fas/FasL的表达。(4)丹龙醒脑片可明显抑制脑缺血再灌注损伤大鼠海马区TNF-α的表达。(5)丹龙醒脑片可明显抑制脑缺血再灌注损伤大鼠海马区caspase-8、caspase-3的表达。
结论:以活血通络法组方的丹龙醒脑片能改善血液流变性,保护海马区神经细胞,这可能与丹龙醒脑片能加速自由基代谢,减轻细胞内Ca2+超载有关。提示丹龙醒脑片可能通过切断脑缺血再灌注后脑损伤病理连锁反应,干预卒中瘀阻脑络证候的发展,从而达到抗卒中瘀阻脑络证的作用,这可能是丹龙醒脑片治疗卒中的作用机制之一。另一方面,也反证了卒中瘀阻脑络证的病理机制可能与上述有害因素有关。死亡受体/配体(Fas/FasL)、TNF-α、caspase-8、caspase-3 参与脑缺血再灌注损伤的发生,丹龙醒脑片具有抗脑缺血再灌注损伤的作用,这一作用可能是通过以下途径实现的:减少脑细胞凋亡的数量、抑制海马区神经元死亡受体/配体(Fas/FasL)、TNF-α表达、抑制海马区死亡受体通路caspase-8、caspase-3 的表达。这表明:丹龙醒脑片从多个环节减轻脑缺血再灌注损伤,达到其抗脑缺血再灌注损伤的目的。