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[研究背景]宫颈癌是女性生殖系统第二大肿瘤,每年全世界有300,000妇女死于宫颈癌。宫颈癌大约85%的病理类型为鳞状细胞癌。淋巴结转移(Lymph node metastasis,LNM)是关系早期宫颈鳞癌患者预后的最重要因素。文献报道在ⅠB～ⅡA期患者中,无LNM的患者五年生存率为80～95%,而伴有LNM的患者五年生存率仅为50～65%。鳞状上皮细胞癌抗原(Squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag)是目前运用最广泛的宫颈癌肿瘤标记物。血清中SCC-Ag水平已被证实与宫颈鳞癌的临床分期、肿瘤直径、治疗后的残余肿瘤量、肿瘤复发、不良预后相关。许多临床研究把SCC-Ag作为判断宫颈鳞癌淋巴结转移的指标,但是各研究报道的诊断效能差异较大,据不同文献报道,IB-IIA期的患者中,SCC-Ag判断LNM的敏感性为60～87%,特异性为41～91%。然而,SCC-Ag既不是宫颈组织的特异性抗原,也不是恶性肿瘤的特异性抗原。宫颈癌临床生化指南指出,在鳞癌患者中,升高的SCC-Ag水平可能提示LNM的发生,但正常的SCC-Ag水平并不能排除LNM,所以关于血清SCC-Ag是否能有效判断LNM仍有待进一步研究。[研究目标]应用meta分析的方法,了解血清SCC-Ag判断宫颈鳞癌患者LNM的综合灵敏度及特异度,计算其综合诊断效能。[研究方法]检索Pubmed、Embase、Cochrane Library及中国期刊网、万方数据库、中国生物医学网,收集当前有关宫颈癌SCC-Ag的所有中英文献,并根据QUADAS(Quality Assessment of Diagnostic Accuracy Studies)质量评价标准评价纳入文献的质量。运用诊断试验meta分析的方法,对纳入研究进行异质性检验,合并敏感性、特异性等指标,绘制SROC曲线、漏斗图,分析发表偏倚。[结果]共纳入10篇符合纳入标准的文献。经随机效应模型分析,SCC-Ag对宫颈鳞癌淋巴结转移的诊断指标合并值分别为：合并敏感度60%(95%CI：54%～65%),合并特异度76%(95%CI：73%～78%),合并诊断比值比5.38(95%CI:3.27～8.87), SROC曲线下面积(AUC)71.26%(欠满意)。诊断界值的选择可能是纳入文献异质性的主要原因。[结论]Meta分析纳入文献质量较好,SCC-Ag对宫颈癌淋巴结转移虽然有一定的诊断价值,但不是一个理想的指标。[研究背景]宫颈癌是女性生殖系统第二大肿瘤,大约85%的病理类型为鳞状细胞癌。淋巴结转移(Lymph node metastasis,LNM)是关系早期宫颈鳞癌患者预后的最重要因素。文献报道在IB-ⅡA期患者中,无LNM的患者五年生存率为80～95%,而伴有LNM的患者五年生存率仅为50-65%。目前没有血清标记物能够预测宫颈癌患者LNM。微小RNA (microRNA,简称1miRNA)是一种约21-23nt的小分子非编码单链RNA,能通过与靶mRNA的3’UTR端特异性碱基配对,进行基因转录或转录后水平调控,调节细胞的生长、增殖、分化、凋亡。目前已有许多报道表明,血清中有大量的稳定表达的miRNA分子,能够作为新型的,非侵入性的肿瘤标记物应用于临床。然而,目前还没有血清1miRNA与宫颈鳞癌相关的研究报道。[研究目标]在宫颈鳞癌患者癌组织和血清样本中,寻找潜在的血清marker miRNA,并评价其判断淋巴结状态的准确性。[研究方法]通过杂交芯片,我们对比了宫颈鳞癌伴LNM患者(n=3)、不伴淋巴结患者(n=3)及健康对照(n=3)的miRNA表达谱,共1450个miRNA被检测,采用“相对强度>1000,P<0.05”作为标准筛选标准,共89个]miRNA存在差异表达(62个高表达,27个低表达),进一步用qPCR检测这89个miRNA在较大样本[宫颈鳞癌伴LNM患者(n=40)、不伴淋巴结患者(n=40)及健康对照(n=20)]中的表达水平,通过统计学分析筛选marker miRNA,这些marker miRNA在LNM病例中存在差异表达,判断LNM的ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)>0.70,并且血清表达水平与宫颈(癌)组织表达一致。拟合所有marker miRNA为一综合因子,绘制综合因子拟合ROC曲线,对比血清鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen, SCC-Ag),再次评价miRNA判断LNM的诊断效能。[实验结果]7个miRNA同时在宫颈癌组织和血清中存在差异表达(AUC>0.7),其中6个miRNA的宫颈(癌)组织表达水平和血清表达水平一致,它们是：miR-1246、miR-20a、miR-2392、miR-3147、miR-3162-5p和miR-4484,绘制这6个1miRNA的综合诊断因子的ROC曲线,结果表明,该综合诊断因子判断LNM的AUC为0.932(最大约登指数0.706,灵敏度0.856,特异度0.850),虽然比它在癌组织中判断的准确性稍低(AUC0.992,最大约登指数0.917,灵敏度0.967,特异度0.950),但比血清SCC-Ag要优越得多(AUC0.713,灵敏度0.612,特异度0.700；血清marker miRNA综合因子与血清SCC-Ag的ROC曲线下比较,P<0.0001),是有临床价值的血清肿瘤标记物。[结论]血清miRNA能够诊断宫颈鳞癌LNM,miR-1246、miR-20a、miR-2392、 miR-3147、miR-3162-5p、miR-4484是有临床价值的标记物。[研究背景]微小RNA-1246(miR-1246)序列于2008年在人胚胎干细胞中测序发现,前人研究表明miR-1246可能是一种潜在的肿瘤标记物,文献报道血清miR-1246可以作为食管鳞癌的血清标记物。前期研究的结果表明,miR-1246在宫颈鳞癌伴淋巴结转移的患者中,无论是癌组织标本还是血清标本,都存在高表达现象,可能是一种癌基因miRNA。[研究目标]探讨miR-1246对人宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。预测并实验证实miR-1246的靶基因,初步探讨miR-1246的生物学机制。[研究方法]人工合成miR-1246的模拟物及抑制物,分别转染SiHa细胞,测定转染效率。采用MTT法对比转染前后SiHa细胞增殖能力的区别；Transwell小室和划痕实验对比SiHa细胞转染前后侵袭、迁移能力的区别；流式细胞仪检测转染前后宫颈癌SiHa细胞神经钙粘连蛋白(N-cadherin, CDH2)的表达差异；Western blot对比转染前后SiHa细胞表达血小板反应蛋白2(thrombospondin2, THBS2)的区别。构建THBS2的3’UTR)双荧光素酶报告载体,检测荧光素的相对活性以在基因水平验证THBS2上存在miR-146的作用靶点。[实验结果]转染miR-1246后,宫颈癌SiHa细胞的增殖、侵袭、迁移能力均增加。生物软件预测CDH2和THBS2是miR-1246的靶基因。转染miR-1246没有让CDH2蛋白表达发生变化,但THBS2蛋白表达降低。双荧光素酶报告系统显示共转染了miR-1246的SiHa细胞荧光素酶表达降低,THBS2的3’UTR端存在miR-1246的作用靶点。[结论]MiR-1246能促进宫颈癌SiHa细胞的增殖与侵袭迁移,降调THBS2蛋白的表达可能是其中一个生物学机制。