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有机磷农药自问世以来便广受关注,种类繁多的有机磷农药能够减少病害、虫害,在我国有着广泛的应用。然而,中低毒类有机磷农药的大量使用使其在环境中的药物残留不断积累,这增加了人体的暴露风险。因此,探究可促进有机磷农药转化与降解的方法具有重要意义。本文主要进行了低毒有机磷杀虫剂辛硫磷的微生物降解研究,在探究降解效果的同时,对其降解机制进行了初步回答。1.沼泽红假单胞菌对辛硫磷的降解效果研究当沼泽红假单胞菌(命名为SPZ)进入生长稳定期后添加药物,在不同时间点通过高效液相色谱技术测定药物浓度并进行相对降解率分析,结果显示,第5天时,终浓度20 mg/L的辛硫磷相对降解率最高可达97.72%,而终浓度为0.2mg/L时,第5天时其相对降解率为10.34%。综上,沼泽红假单胞菌对高浓度辛硫磷具有更好的降解效果。此外,实验数据还证明辛硫磷不能作为沼泽红假单胞菌SPZ的唯一碳源或者唯一磷源供细菌生长,但当作为外加碳源时,低浓度辛硫磷对菌株SPZ生长有一定促进作用。另一方面,通过比较加热致死菌与活菌对辛硫磷的降解效果,结果显示失去活性的光合细菌几乎无法促进辛硫磷降解,活菌组辛硫磷降解较对照组显著提高,较死菌组极显著提高。2.蛋白核小球藻与辛硫磷的相互作用研究根据蛋白核小球藻(MH-1)在含辛硫磷环境下的生长情况分析,当辛硫磷浓度高于2.0μg/m L时即可对MH-1生长产生显著抑制作用,表现在叶绿素含量与生物量显著下降,说明辛硫磷对蛋白核小球藻的最大非毒性浓度为2.0μg/m L。在非毒性浓度范围内,5 d内的MH-1对辛硫磷的净降解率分别可达49.66%(0.2μg/m L)和39.61%(2.0μg/m L),日平均降解速率分别为0.02μg/m L(0.2μg/m L)和0.38μg/m L(2.0μg/m L)。MH-1对辛硫磷有一定的富集能力,72 h内对辛硫磷的富集呈现先升高后降低的趋势,120 h时对0.2μg/m L和2.0μg/m L的辛硫磷富集量分别为0.16 mg/g FW和0.25 mg/g FW。3.三种光合细菌计数方法的比较研究光合细菌作为一种兼性厌氧菌,生长受到环境氧气含量影响。常用的细菌计数方法诸如平板计数法、显微镜计数法和比浊法,然而受制于厌氧需求,上述方法并不适用于光合细菌计数。相比传统计数方法,分子生物学手段具有耗时短、效率高等优势。我们以流式细胞术作为对照,同时利用实时荧光定量法(Quantitative Real-time PCR,q PCR)和最大或然数-聚合酶链式反应法(Most probable number-Polymerase chain reaction,MPN-PCR)对光合细菌进行计数。通过MPN-PCR法测得的细菌浓度与其波长660nm下的光密度呈良好的线性关系,R~2=0.9995;通过q PCR检测得到细菌浓度与Ct值之间的标准曲线,当细菌浓度为3.05×10~3-3.05×10~6/ml时,二者呈线性相关,R~2=0.999;通过比较流式细胞术与平板计数结果,我们验证了本实验条件下流式细胞术用于细菌计数的可行性。利用标准曲线与流式细胞术检测模型,我们对5个批次的光合细菌进行计数,结果显示,所有批次样品均可被三种方法有效计数,其中流式细胞术计数结果最高,实时荧光定量PCR与MPN-PCR计数结果较低。MPN-PCR法与实时荧光定量PCR法测得结果相关系数为0.9782,与流式细胞术测得结果相关系数为0.9918。结果表明,MPN-PCR作为一种低成本计数方法,在提高计数效率的同时,又可保证计数结果的科学性和准确性,有望开发成为光合细菌的标准计数方法。