紫外光照对Aβ42聚集体稳定性和细胞毒性的影响

来源 :华中师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:helen_shen
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阿尔兹海默病,又称老年痴呆症,主要病理特征之一为β淀粉样多肽(Amyloid-β peptide-Aβ)的大量沉积,Aβ40是主要的Aβ物种,占90%,其余的10%为Aβ42,但Aβ42更易发生聚集,是老年斑中Aβ的主要形式。研究表明,金属离子Cu2+、Zn2+等一定程度上促使可溶性的Aβ单体聚集形成不溶性的Aβ聚集体,Aβ聚集在老年痴呆症中发挥着重要作用。在课题组的前期工作基础上,本文采用两种解聚效果较明显的荧光螯合剂,系统的研究了其对Aβ42-金属聚集体解聚的促进作用及在不同细胞系中的毒性变化。此外,采用BCA(Bicinchoninic acid)、聚丙烯酰胺凝胶电泳、透射电镜等多种方法研究了紫外光照对Aβ42-金属聚集体稳定性的影响,并用MTT(Methyl thiazolyl tetrazolium)法测定了经光照后Aβ42聚集体的毒性变化。本论文取得的实验结果主要包括:一、用MTT法测定了Aβ42-金属聚集体在不同细胞系中的毒性变化,发现同种聚集体作用于不同种类的细胞,其毒性有所区别,单独的Aβ42聚集体与细胞作用后,存活率都在80%以上,新鲜的Aβ42比Aβ42聚集体的毒性稍大,推测可能与聚集体形态有关,即相对于成熟的纤维状聚集体,可溶性的寡聚体毒性更大;Cu2+-FC-11和Cu2+-FC-12具有很强的细胞毒性,推测可能与Cu2+的分子内共轭电荷转移有关,Aβ-Cu2+中加入FC-11或FC-12后,两种配体均可较大程度的螯合聚集体中的Cu2+,所以毒性也很大,通过合成一种新的化合物FC-11-1,与FC-11的区别是没有左边的荧光基团,实验结果证实了上述推测。二、光照实验中,通过BCA法检测紫外光照对聚集体稳定性的影响,发现体系中可溶性蛋白含量随着光照时间的延长而逐渐增加,说明光照能够促使Aβ42聚集体一定程度的解聚。三、细胞毒性实验结果表明,经光照后的聚集体毒性随着光照时间的延长、光照强度的增强及Aβ42浓度的增大而逐渐增大。四、聚丙烯酰胺凝胶电泳和透射电镜实验结果表明,与避光条件下的Aβ42聚集体相比,经750LUX光强照射后,各聚集体都有一定程度的解聚,尤其是含Cu2+的Aβ42聚集体,解聚效果非常明显。但是随着光照时间的延长,单独的Aβ42聚集体及由Cu2+、Zn2+诱导的Aβ42聚集体聚集程度反而有所增大,并且随着光照强度的增强和光照时间的延长,聚集程度越来越大;但由Cu2+诱导的聚集体的聚集程度没有Aβ42、Aβ42-Zn2+聚集体的聚集程度大。
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