喉鳞状细胞癌中mir-93、mir-106b表达与wnt/β-catenin通路靶蛋白研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lrdg
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【目的】喉鳞状细胞癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一。近年来MicroRNA分子在癌症早期诊断,肿瘤发生,疾病预测等各个方面,成为新的研究热点。但MicroRNA在喉鳞状细胞癌的研究较少,仅检测其表达情况。本研究从基因芯片筛选的喉鳞状细胞癌组织与癌旁切缘中差异性microRNA表达谱中挑选出高表达的mir-106b、mir-93,在石蜡样本中进行q-PCR验证,同时检测其可能参与的wnt/β-catenin通路中关键蛋白分子MUC1、β-catenin、cyclinD1的表达情况,结合病理资料探讨与喉鳞癌发生发展的分子机制以及成为喉鳞癌分子治疗候选靶点奠定基础。【方法】1、利用looped-primer Real-time PCR在喉鳞状细胞癌石蜡包埋组织检测mir-93、mir-106b的表达情况,并结合临床病理参数进行分析;2、结合国内外文献并综合应用专业数据库miRBase、Target Scan、在线软件(http://cloud.genomics.org.cn/home.xhtml)等预测相应的靶基因;3、应用MaxVision免疫组织化学方法,检测wnt/β-catenin通路中关键蛋白分子MUC1、β-catenin、cyclinD1在喉鳞状细胞癌与癌旁正常切缘石蜡包埋组织中的表达,经统计学分析三者表达与各临床参数的关系。【结果】1、喉鳞状细胞癌中mir-93、mir-106b的表达量均高于癌旁正常切缘,差别具有统计学意义(p=0.017,p=0.019)。2、预测到mir-93、mir-106b相应的靶基因:MUC1、β-catenin、cyclinD1。3、χ~2检验结果显示mir-93、mir-106b在病理分期、临床分期、肿瘤部位、淋巴结转移总体具有统计学意义。进一步经Spearman秩相关检验显示,mir-106b、mir-93与临床分期呈正相关(r=0.467, r=0.380),mir-106b、mir-93在T3、T4期较T1、T2期差别具有统计学意义(p=0.000,p=0.002);二者均与淋巴结具有统计学意义,其中mir-106b、mir-93与淋巴结转移呈正相关(r=0.300, r=0.442),三者在淋巴结转移具有统计学意义(p=0.015,p=0.000)。4、在喉鳞状细胞癌中,Mucin1在癌细胞胞质中阳性表达,阳性表达率为44.6%,高于癌旁正常切缘组织8.6%(p<0.001);β-catenin存在胞质与胞核的异位表达,其异常表达率为58.5%,而癌旁正常切缘组织中异常表达仅为2.9%,两者具有显著差异(p<0.001);cyclinD1存在胞核的阳性表达,表达率为78.5%,与癌旁正常切缘组织中具有显著差异(p<0.001);MUC1与β-catenin的阳性表达呈正相关(r=0.361,p=0.013),β-catenin和cyclinD1呈正相关(r=0.210,p=0.003)。5、经χ2检验结果显示,MUC1阳性表达率在淋巴结转移的阳性率为21.1%、无淋巴结转移阳性率为54.3%,差异具有统计学意义(P=0.014)。β-catenin异常表达率在病理分期低、中、高分化分别为30.0%、72.7%、50.0%,三者的总体差异具有统计学意义(P=0.024),进一步对三者进行两两比较,结果显示中分化的异常表达率与低、高相比,差异具有统计学意义(P=0.034);β-catenin异常表达率在淋巴结转移的阳性率为36.8%、无淋巴结转移阳性率为67.4%,差异具有统计学意义(P=0.023)。cyclinD1阳性表达率在病理分期低、中、高分化分别为70.0%、90.9%、63.6%,三者的总体差异具有统计学意义(P=0.035)。cyclinD1阳性表达率在淋巴结转移的阳性率为57.9%、无淋巴结转移阳性率为87.0%,差异具有统计学意义(P=0.024)。而MUC1阳性率、β-catenin异常表达率、cyclinD1阳性表达率在年龄、临床分期、肿瘤部位均无统计学意义【结论】1、筛选喉鳞状细胞癌相关的microRNA,并进行功能与临床参数相关研究,从基因水平为研究喉鳞状细胞癌提供新思路;2、Mucin1表达增高的同时β-catenin异常表达、cyclinD1阳性表达增高,三者协同可作为喉鳞状细胞癌新的生物学标记物。
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