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本论文分为三部分:一、大鼠左肺原位移植模型的建立;二、一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注过程中的表达变化;三、L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注损伤中的作用研究。一、大鼠左肺原位移植模型的建立目的在“三袖套管吻合法”基础上,探讨大鼠左肺原位移植最佳模型,为进一步开展移植肺缺血再灌注损伤提供动物模型基础;方法显微镜下采用“三袖套管吻合法”完成大鼠左肺原位移植模型,通过手术成功率、手术时间、移植肺功能、病理学改变和影像学检查等评估模型的可行性;结果完成大鼠左肺原位移植20例,手术成功率85%。供肺灌洗到获取完成时间13.1min±0.9min,供肺体外套管时间9.3min±0.7min,供受体动静脉和支气管吻合时间33.7min±1.7min。夹闭实验显示移植肺单肺通气能维持20min以上。病理学证实移植肺再灌注2h能复制典型的缺血再灌注损伤模型;结论本实验在“三袖套管吻合法”的基础上,综合国内外大鼠肺移植模型的优缺点,根据研究需要进行了适当的改进,力图建立大鼠左肺移植的最佳模型。模型在显微镜下单人完成,缩短了套管和动静脉及支气管的吻合时间,减少了热缺血时间,提高了手术成功率和大鼠存活率。病理学证实本模型可以复制出典型的移植肺缺血再灌注损伤病理变化情况,是适于研究缺血再灌注损伤的理想模型。二、一氧化氮合酶在大鼠肺移植缺血再灌注过程中的表达变化目的观察一氧化氮合酶(NOS)在大鼠肺移植缺血再灌注过程中的表达变化情况;方法12只SD大鼠完成6次大鼠左肺移植,分别于开胸时(Ⅰ组)、灌洗后(Ⅱ组)和冷缺血后(Ⅲ组)取供体大鼠右肺组织提取RNA,再灌注后2h(Ⅳ组)取供体左肺组织提取RNA,再灌注后2h取受体的右肺组织(Ⅴ组)提取RNA,逆转录生成cDNA。应用荧光定量PCR技术检测肺组织中的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;结果与Ⅰ组相比,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅴ组的eNOS和iNOS无明显变化。Ⅳ组与Ⅰ组相比eNOS表达明显减低,而iNOS表达明显升高;结论通过对肺移植整个缺血再灌注过程各个阶段的观察,证实再灌注是引起移植肺一氧化氮合酶变化的重要因素之一。三、L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注损伤中的作用研究目的探讨L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注损伤中的作用及其机制;方法,将48只SD大鼠随机分为4组,即肺移植组(A组)、L-精氨酸组(B组)、氨基胍组(C组)和L-精氨酸+氨基胍组(D组)。每组12只,行同种异体左单肺移植。手术成功后分别腹腔注射生理盐水、L-精氨酸、氨基胍和L-精氨酸+氨基胍。再灌注2h后取移植肺上端肺组织检测髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶活力(SOD)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性;取静脉血测定血液中NO含量;取移植肺下端肺组织测定干湿重比(W/D),分别对四组标本行肺组织病理形态学观察;结果再灌注2h后,与A组相比,B组iNOS和eNOS的活性均升高,血液中NO含量高于A组,移植肺的W/D、MPO和MDA含量降低,SOD含量增高(P均＜0.05)。C组的iNOS活性降低(P＜0.05),eNOS的活性没有变化,NO含量低于A组(P＜0.05),其W/D、SOP、MPO和MDA均无明显变化。D组的iNOS活性降低(P＜0.05),eNOS活性升高P＜0.05),血液中NO含量也增高(P＜0.05),其W/D、MPO、MDA均降低(P＜0.05),SOD升高(P＜0.05)。B组和D组相比,D组的iNOS活性降低(P＜0.05),而eNOS活性没有变化,NO的含量降低(P＜0.05),其W/D、MPO、MDA降低(P＜0.05),SOD升高(P＜0.05)。病理形态学检查显示D组的炎细胞浸润及炎症渗出最轻,B组次之,A组和C组最差;结论移植后再灌注早期应用L-精氨酸可以减轻移植肺的缺血再灌注损伤,联合应用L-精氨酸和氨基胍减轻肺缺血再灌注损伤的作用好于单纯应用L-精氨酸,但再灌注早期应用氨基胍并不能减轻移植肺的损伤。应用L-精氨酸减轻缺血再灌注损伤与由eNOS途径产生的NO增多有关。