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包拉米虫(Bonamia)是影响世界贝类养殖业发展的主要病原,包拉米虫病(Bonamiasis)为OIE规定的必报水生动物疫病之一。多年来我国一直没有水生动物包拉米虫病发生的报道,但近期在对我国某养殖场的一批牡蛎样品进行包拉米虫检测时发现了该病原。因此,建立包拉米虫检测和鉴定的方法,对我国牡蛎包拉米虫病的检疫和防治及水产养殖业的发展都具有极其重要的意义。本研究内容包括四个部分:1、从我国某养殖场采集牡蛎样品,建立了牡蛎包拉米虫的血淋巴涂片、组织印记和石蜡切片等病原学检测方法,结果显示:包拉米虫呈球形或卵圆形,大小为2～5μm,姬姆萨液染色后,细胞核红染,细胞质蓝染。虫体寄生在宿主的血淋巴细胞等组织细胞内。2、建立了包拉米虫PCR检测方法,并结合PCR-RFLP方法对分离的包拉米虫进行了种属鉴定,结果表明:本研究所分离到的包拉米虫为牡蛎包拉米虫(Bonamia ostreae)。3、采用地高辛标记包拉米虫DNA探针,建立了包拉米虫的原位杂交检测方法,结果在良好的反差背景下成功的观察到了包拉米虫特异性染色,证明所检样品中有包拉米虫。4、依据包拉米虫基因组的保守区rRNA操纵子的内部转录区(ITS-1),设计了特异性引物和TaqMan探针,通过对反应体系和条件的优化,建立了检测敏感性可以达到10拷贝阳性质粒模板DNA的TaqMan实时荧光PCR快速检测方法,使用该方法对111份牡蛎样品进行包拉米虫检测,结果显示:67份为感染阳性,感染率为60.36%。综上所述,本研究在我国首次检测到了牡蛎包拉米虫病原的存在,并建立了组织切片、原位杂交、PCR-RFLP及荧光PCR等系列检测鉴定方法,为我国口岸贝类产品的进出境检疫及我国牡蛎养殖场包拉米虫流行病学调查提供了有效的技术途径。