星状病毒（Astroviruses,Ast V）是一种人畜共患病病原,常引发急性胃肠道疾病,是一种可感染多种宿主且广泛存在的病原体,Ast V的全基因组由3个开放阅读框（ORF1a、ORF1b和ORF2）组成。猪星状病毒（Porcine astrovirus,Po Ast V）是哺乳动物星状病毒属（Mamastroviruses,MAst V）的RNA病毒,共有5种基因型,被认为是一种与腹泻相关的病原体。目前安徽地区关于Po Ast V的遗传进化研究有限,有待对其进行深入研究。本研究在2020年10月～2021年7月间收集了来自于安徽省7个地市,总计19个不同规模养猪场的118份猪的粪便拭子样本,其中腹泻样本39份（33%,39/118）,非腹泻样本79份（66.9%,79/118）。利用鉴定引物进行RT-PCR检测,结果显示有11份样本（9.3%）检出Po Ast V阳性,其中只有1例来自非腹泻育肥猪。在腹泻样本中阳性样本占20.5%（8/39）,且这8例阳性样本均来自仔猪粪便。可见Po Ast V在仔猪中的感染率更高。本研究分别对检测到的3种基因型（Po Ast V-Ⅰ、Po Ast V-Ⅱ和Po Ast V-Ⅳ）进行扩增,利用Seq Man软件拼接得到的11株Po Ast V完整的全基因组序列,基因组全长在6.2-6.7kb,将其上传获得11个Gen Bank登录号。通过全基因组序列以及ORF2基因的遗传进化分析,发现在安徽省内主要流行的基因型是Po Ast V-Ⅱ。与Po Ast V-Ⅰ、Po Ast V-Ⅱ及Po Ast V-Ⅳ的全基因组核苷酸相似度最高的分别是84.5%（中国广西毒株）、80.8%（韩国毒株）和80.2%（中国江西南昌毒株）。通过ORF2同源性分析也证明了ORF2存在遗传差异性。使用RDP4.0软件对重组事件分析获得四个有潜在重组的毒株。ORF2选择压力分析发现,Po Ast V在系统进化中存在多个正向选择作用位点。B细胞表位残基上存在一个正向选择作用位点,说明PoAstV的免疫表位存在变异的可能。由于ORF2编码Po Ast V的衣壳蛋白决定病毒的免疫原性,故对衣壳蛋白的理化性质,抗原表位等一系列生物信息学相关内容进行预测分析。综上Po Ast V的ORF2基因揭示了潜在的遗传变异性和遗传异质性。本研究针对Po Ast V-Ⅱ型高度保守的ORF1b基因设计了一对特异性引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测方法。灵敏性实验中RT-q PCR的检测限是3.598×10~1拷贝/μL,利用相同引物及模板进行传统PCR的检测限为3.598×10~4拷贝/μL;将Po Ast V与猪腹泻相关病毒（PCV-Ⅱ、PBo V、PPV、PKV、TTSu V）为模板进行特异性试验,只有Po Ast V呈现扩增曲线;重复性试验中组内和组间的变异系数（Coefficients of Variation,CV）分别在0.12%～0.27%和0.07%～0.19%范围内。与传统PCR检测方法相比临床样本检测结果显示,RT-q PCR的检出率11%（13/118）高于传统PCR的检出率5.9%（7/118）。综上可知,本研究构建的RT-qPCR检测方法在灵敏度和重复性以及临床检测方面都更具优势,更适合作为一种快速、经济的PoAstV-Ⅱ型早期诊断手段。