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目的宫颈癌是女性最常见的恶性妇科肿瘤之一,由于癌细胞容易发生侵袭及转移,传统治疗方式的5年生存率仍十分低下[1]。大量研究表明高危型人乳头瘤病毒(human papiuoma virus,HPV)的感染(如HPV16/18)是宫颈癌发生的必要条件[2],但是除了HPV E6/E7外,还有多种基因共同协助或者拮抗器完成宫颈癌的发生发展[3]。本研究通过构建的microRNA芯片分析筛选出了受E6/E7的调控的相关的miR-630,并对miR-630在宫颈癌细胞中的功能及分子机制进行了研究。方法1、利用RNA干扰技术,在宫颈癌细胞Caski及Ms751中特异敲低后HPV E6/E7后,送上海欧易生物有限公司制作芯片;2、利用RNA干扰技术,将基因芯片技术及生物信息学分析技术分析宫颈癌细胞中显著受HPV16/18E6/E7调控的miR-630,在宫颈癌细胞株中进行验证;3、用RT-PCR法比较宫颈组织和宫颈癌组织之间,miR-630的表达差异;4、利用慢病毒载体构建过表达和稳转干扰的细胞株,分别检测其对宫颈癌细胞株的增殖、侵袭、迁移的影响;5、利用RT-PCR法及蛋白免疫印迹(Western blotting)检测了过表达和稳转干扰的细胞株中上皮间充质转换(EMT)的标志物的表达变化;6、利用生物技术分析在转录水平上影响;7、将对生物分析的结果利用染色质免疫共沉淀实验在细胞株中进一步验证;8、构建荧光素酶基因报告系统,检测miR-630在宫颈癌中可以调控的靶基因。结果1、根据特异性敲低HPV E6/E7后构建的microRNA基因组芯片分析发现有多个microRNA随着E6/E7的敲低表达发生改变,其中有8个microRNA表达发生下调,23个microRNA表达上调,其中,miR-630引起了我们的关注;2、在4株宫颈癌细胞株中,miR-630的表达随着敲低E6/E7而上调;3、在宫颈癌组织中miR-630的表达明显低于正常宫颈癌组织;4、划痕实验显示,稳定干扰miR-630的宫颈癌细胞(HeLa和SiHa)与对照组比较,细胞的迁移能力明显增强,而过表达miR-630后细胞的迁移能力明显减弱,且统计学友明显差异(P<0.01)。而侵袭迁移实验均显示,与对照组相比。干扰miR-630后穿出小室的细胞明显增多,而过表达miR-630组穿出的细胞明显减少,统计均有显著的差异性(p值均<0.001);5、细胞增殖实验结果显示:miR-630稳定干扰细胞及过表达细胞的增殖能力,与对照组相比,并无显著改变(p值均>0.05);6、裸鼠肺转移实验显示,肉眼观察提示过表达miR-630 Ms751组肺部肿瘤明显少于对照组。HE染色发现过表达miR-630 Ms751组肺部成瘤明显少于对照组,且有统计学差异(p值<0.001);7、在miR-630稳定干扰细胞中,与对照组相比,EMT的上皮细胞标志物表达明显降低,而间质细胞标志物表达升高,差异有显著性(p值均<0.001);miR-630稳转过表的细胞EMT的间质细胞标志物表达升高,而上皮细胞标志物表达降低,差异有显著差异性(p值均<0.001);8、生物信息学、染色质免疫共沉淀实验及细胞实验显示在宫颈癌细胞中P53可以正向调控miR-630的表达;9、通过生物信息学分析及荧光酶素报告基因实验提示,CTHRC13UTR’突变后的荧光霉素活性明显低于CTHRC1 3UTR’野生型后的荧光霉素活性,差异有显著性(p值均<0.001)。细胞功能实验中,在宫颈癌细胞株中miR-630的表达高则CTHRC1表达相对低;而在miR-630的表达相对较低CTHRC1表达则相对较高。miR-630表达相对较高的细胞株中干扰miR-630后,CTHRC1表达升高;miR-630表达相对较高的细胞株中在干扰miR-630后,CTHRC1表达降低,差异有显著性(p值均<0.001)。结论1、在HPV16、18感染宫颈癌中,miR-630可以抑制癌细胞的侵袭与迁移;2、miR-630可以显著的抑制HPV16、18的宫颈癌细胞的EMT表型;3、HPV E6/E7通过调控P53影响miR-630的表达;4、CTHRC1为miR-630的下游直接靶向调控的目的基因。