白藜芦醇,化学名为3,4’,5-三羟基-反-均二苯代乙烯,是一种多酚类植物抗毒素。越来越多的研究显示,白藜芦醇具有多种生物学特性,包括抗血小板凝集、抗增殖活性、抗肿瘤活性、抗氧化特性,因而具有心血管保护作用、抗肿瘤作用、抗炎性作用及神经保护作用等多种健康益处。近年来,白藜芦醇可能具有的神经保护作用受到了越来越多的关注。但是,对于白藜芦醇神经保护作用的分子机制目前尚未完全明确。在本实验中,我们采用二维荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)结合质谱分析(MS)方法来研究白藜芦醇处理的SH-SY5Y细胞的差异蛋白表达情况,为探索白藜芦醇神经保护的分子机制提供新的线索。目的：检查不同剂量的白藜芦醇对SH-SY5Y细胞的影响,初步探讨白藜芦醇的剂量依赖性。进一步,应用25μM白藜芦醇处理SH-SY5Y细胞24小时,并研究白藜芦醇作用SH-SY5Y细胞的差异蛋白质组学改变以阐明白藜芦醇的神经保护机制。方法：各组SH-SY5Y细胞分别用不同浓度的白藜芦醇(5μM、10μM、25μM、50μM、100μM)处理24小时,倒置显微镜下观察SH-SY5Y细胞形态学变化,MTT比色法检测白藜芦醇处理后各组细胞的存活率,AO/EB染色法检测各组细胞凋亡的情况。然后以25μM白藜芦醇处理SH-SY5Y细胞24小时,采用2D-DIGE和MALDI-TOF MS技术分析蛋白质表达水平的改变。应用Western Blot方法验证MS鉴定出的蛋白质(Erol-Lα)的表达。结果：不同浓度白藜芦醇处理SH-SY5Y细胞24h,形态学观察低剂量组(5μM、10μM、25μM)细胞形态无明显变化,而在高剂量组(100μM)细胞胞体明显变圆、树突消失,表现为凋亡细胞形态。MTT比色法表明,随白藜芦醇浓度增加,细胞活力逐渐下降；细胞存活率的比较,高剂量组与低剂量组之间差异有显著性。AO/EB染色法显示低剂量组细胞无凋亡,而高剂量组出现大量的凋亡细胞。应用蛋白质组学方法(2D-DIGE和MALDI-TOF MS)对白藜芦醇(浓度为25μM)处理后的SH-SY5Y细胞差异表达蛋白质进行鉴定。共有34个蛋白点表达了至少1.3倍的丰度差异,其中5个差异表达蛋白质被成功鉴定出来,分别为内质网氧化还原酶1(Erol-like protein alpha, Erol-Lα); p21活性激酶(p21-activated kinase 1, PAK1);外壳蛋白Ⅰ(COPI)复合物亚基(ARCN1 protein);T-复合体蛋白1(T-complex protein 1);T细胞受体β链(T cell receptor beta chain)。它们在功能上分别与内质网应激、信号转导、囊泡转运、伴侣蛋白、免疫调节有关,这些结果提示氧化应激保护、囊泡分子转运调节、免疫功能调节、信号转导途径调节等可能是白藜芦醇神经保护作用的分子机制之一。Western Blot方法成功验证了质谱鉴定出的Erol-Lα蛋白。结论：本研究结果表明多种调节机制参与白藜芦醇的神经保护作用。本实验中发现的Erol-Lα、ARCN1 protein、T cell receptor beta chain是白藜芦醇研究中首次报道。这些结果为探索白藜芦醇神经保护作用机制及发现药物作用潜在靶点提供了新的线索。本研究从质谱学和免疫学两个不同的角度确定Erol-Lα蛋白表达,证明了质谱鉴定的可靠性。