钩吻醇提物抗腹泻的作用研究

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钩吻(Gelsemium elegans benth)具有抗炎、增强免疫、改善肠道形态、调整盲肠菌群等作用,在养殖业中常用于促进畜禽生长。钩吻促生长机理可能与钩吻改善肠道形态结构,调节肠道菌群和抗炎作用等相关,但尚未见钩吻对腹泻作用的研究,钩吻促生长作用是否与钩吻抗腹泻作用相关也尚未见报道。本团队前期研究表明,在钩吻醇提物、钩吻水提物和钩吻酸水提物中,以钩吻醇提物促猪生长效果最好,因此,本试验拟观察钩吻醇提物的抗腹泻作用,并进行抗腹泻作用机理的初步探讨。1.提取钩吻醇提物,利用酸性染料采取比色法测定钩吻醇提物中生物碱含量;通过急性毒性实验,测定钩吻醇提物对小鼠的毒性反应,以确定合适的给药剂量;建立蓖麻油与番泻叶致小鼠腹泻模型,观察钩吻醇提物对小鼠腹泻的影响,并测定钩吻醇提物对小鼠在体小肠推进运动的影响。结果显示,钩吻醇提物中生物碱含量为4.01%,合适的钩吻醇提物高中低给药剂量分别为:30 mg/mL、20 mg/mL、10 mg/mL;蓖麻油诱导腹泻模型组小鼠腹泻指数为(164.20±23.27)%,钩吻醇提物高、中、低剂量组小鼠腹泻指数分别为(105.22±19.38)%、(108.17±39.35)%、(111.12±26.87)%;番泻叶诱导腹泻模型组小鼠的腹泻指数为(213.00±66.00)%,钩吻醇提物高、中、低剂量组小鼠腹泻指数分别为(87.04±31.36)%、(102.64±41.84)%、(128.20±50.07)%;腹泻组小鼠小肠推进率为(75.88±8.89)%,钩吻醇提物高中低剂量组小鼠小肠推进率分别为(58.58±7.23)%、(64.01±4.68)%、(69.23±8.69)%。实验结果表明,各剂量组钩吻醇提物均能有效治疗腹泻,并明显抑制小鼠在体肠推进运动,其中,高剂量组作用显著(P<0.05)。2.采用BL-420E生物机能实验系统,观察钩吻醇提物对离体肠肌自发性收缩及工具药ACh、BaCl2及HA所致挛性收缩的影响,并观察IP3受体阻断剂HP、肌浆网Ryanodine受体阻断剂RR和NO合酶抑制剂L-NAME作用下钩吻醇提物的作用,记录肠肌运动波形、平均张力和收缩频率。结果显示,钩吻醇提物可剂量依赖性地抑制兔小肠平滑肌自发性收缩的频率和张力;对ACh、BaCl2及HA引起的小肠痉挛性收缩有不同程度的抑制作用,用L-NAME、HP和RR处理后,L-NAME明显拮抗了钩吻醇提物对离体肠收缩的抑制作用,而HP则对钩吻的舒张作用有显著增强,但RR无明显影响。结果表明,钩吻醇提物可明显抑制兔小肠平滑肌自主收缩的频率和张力,其作用机制可能与阻断M受体和H1受体,升高一氧化氮(NO)浓度,抑制IP3受体介导的内钙释放有关,但对肌浆网Ryanodine受体途径引起的内钙释放无关。3.建立小鼠醋酸炎症模型,尾静脉注射伊文斯兰,测定钩吻醇提物对小鼠腹腔伊文斯兰渗出液含量的影响,结果显示,钩吻醇提物高、中剂量组小鼠腹腔伊文斯兰渗出量显著降低(P<0.05);4.建立番泻叶诱导腹泻大鼠模型,ELISA法测定大鼠血清中胃肠激素(GAS、VIP、MTL)水平和炎症因子(IL-1β、IL-10、TNF-α)水平,结果表明,钩吻醇提物高中低剂量组对腹泻引起的MTL与GAS水平升高、VIP水平降低以及对炎症因子IL-1β、TNF-α的增高,同时对抗炎因子IL-10的降低有不同程度的恢复作用,尤其是钩吻醇提物高剂量组作用效果最好。
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