目的探讨药用大黄治疗斑马鱼血栓的作用机制,明确药用大黄活血作用的质量标志物（Quality-Marker,Q-Marker）。方法1.建立苯肼诱导的斑马鱼血栓模型,通过2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（Dichlorodihydrofluorescein Diacetate,DCFH-DA）染色后计算其染色强度（Staining Intensity,SI）、染色面积及血栓抑制率,评价药用大黄对血栓斑马鱼的治疗作用。2.采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术（Ultra Performance Liquid Chromatography-Quadrupole-Time of Flight Mass Spectrometry,UPLC-Q-TOFMS）结合数据库筛选,获得药用大黄的主要化学成分。利用在线数据库和软件对成分和血栓的交集靶点进行基因本体（Gene Ontology,GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）代谢通路富集分析。3.筛选斑马鱼代谢样品的差异代谢物,通过整合通路富集分析,寻找药用大黄治疗血栓的主要代谢途径及关键靶点和代谢物。最后,分别利用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）和靶向代谢组学实验进行验证。4.建立十产地药用大黄的UPLC指纹图谱,评价不同产地药用大黄的质量差异。利用NOS3 ELISA试剂盒测定不同产地药用大黄的生物活性。进一步将化学成分与生物活性测定结果进行偏最小二乘（Partial Least Squares,PLS）回归分析,筛选药用大黄的Q-Marker。最后,对不同产地的药用大黄Q-Marker进行含量测定。结果1.对斑马鱼形态学进行观察并计算,结果表明药用大黄干预后能显著降低血栓区域SI与染色面积,提高血栓抑制率,说明药用大黄对血栓斑马鱼具有良好的治疗作用。2.本实验共筛选出药用大黄21个有效成分。在“药材-疾病-成分-靶点”网络中,大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等成分以及NOS2、NOS3等靶点为核心节点。GO及KEGG通路富集结果表明,“成分-疾病”共有靶点涉及的生物学过程主要有血管生成、细胞凋亡、氧化应激、血液凝固等,参与流体剪切应力和动脉粥样硬化、补体与凝血级联反应等信号通路。3.根据多元统计分析结果,共筛选出差异代谢物341个。整合通路富集到的主要代谢通路为精氨酸生物合成,在此通路中,与血栓疾病的发生和发展相关的靶点和代谢物分别为NOS3、精氨酸、谷氨酸和谷氨酰胺。实验验证结果表明,药用大黄干预后,精氨酸含量显著升高,谷氨酸和谷氨酰胺含量均有所降低,NOS3 m RNA的表达水平升高。4.指纹图谱及相似度评价结果表明,十产地药用大黄的质量存在差异。NOS3ELISA试剂盒测定结果显示,不同产地来源的药用大黄生物活性大小不同。“成分-活性”关联结果表明,芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚与生物活性相关系数较高。其中芦荟大黄素和大黄素的变量投影重要性指标（Variable Importance in Projection,VIP）大于1,因此,本研究将芦荟大黄素和大黄素作为药用大黄药材质控的QMarker。结论本研究结合网络药理学、代谢组学及多元统计分析方法,得出药用大黄主要通过激活NOS3,并调节精氨酸、谷氨酸和谷氨酰胺的代谢水平,发挥抗血栓的治疗作用。与药用大黄活血化瘀作用密切相关的化学成分主要有芦荟大黄素和大黄素,可作为药材质控的Q-Marker。