论文部分内容阅读
目的：在体内研究生物钟基因Period1(Per1)、Period2（Per2）对鼠胶质瘤和正常脑组织细胞中的表达节律及在不同时间段对胶质瘤细胞的放疗调控作用，观察在Per1、Per2不同时间段放疗后对胶质瘤和正常脑组织细胞的增殖及凋亡能力的影响。方法：将体外培养的胶质瘤C6细胞接种于SD大鼠右侧的尾状核区，建立SD大鼠的胶质瘤动物模型。建好的胶质瘤动物模型在12h光照/12h黑暗的光暗条件下饲养3周，建立大鼠的生物节律模型。将建好的SD大鼠生物节律模型分别在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同时段处死，取右侧的胶质瘤组织和对侧的正常脑组织标记后迅速放于液氮中保存。应用Real-timePCR在转录水平上定量观察大鼠脑胶质瘤细胞和正常脑组织细胞Per1、Per2mRNA的及肿瘤组织Per1、Per2蛋白表达情况。利用直线加速器，在4h,8h,12h,16h,20h,24h等不同时段对建好的SD大鼠的节律模型进行照射，利用PCNA免疫组化技术检测不同时间点胶质瘤细胞及正常脑组织细胞的增殖情况，同时利用激光共聚焦技术检测胶质瘤细胞及正常脑组织细胞的凋亡情况。结果：Per1、Per2基因在脑胶质瘤及正常脑组织中都呈现出明显的节律性。在胶质瘤细胞中，Per1、Per2的振荡节律约为12小时，在这种节律表达中Per1的表达峰值在ZT4，ZT16，谷值在ZT12，ZT24，其中最高点在ZT4，最低点在ZT24；Per2的表达峰值在ZT12，ZT24，谷值在ZT8，ZT20，其中最高点在ZT24，最低点在ZT20；在正常脑组织细胞中，Per1、 Per2的振荡节律约为24小时，在这种节律表达中Per1的表达峰值在ZT8，谷值在ZT24，其中最高点在ZT8，最低点在ZT24；Per2的表达峰值在ZT12，谷值在ZT24，其中最高点在ZT12，最低点在ZT24。肿瘤组织24h蛋白表达也显示出与mRNA表达相接近结果，也呈现出12h的节律表达。放疗后利用PCNA检测增殖情况显示，在胶质瘤组织细胞中，Per1在其高表达及低表达时间点细胞的增值能力没有显著差异，在此时间点的正常脑组织细胞的增值能力无显著差异；在胶质瘤组织细胞中，Per2高表达时间点肿瘤细胞的增殖能力明显低于其低表达时间点，同时在此时间点的正常脑组织细胞的增值能力无显著差异。放疗后利用Tunel法检测胶质瘤细胞及正常脑组织细胞的凋亡情况，胶质瘤组织细胞中，Per1在其高表达和低表达时间点肿瘤细胞的凋亡无显著差异，在此时间点的正常脑组织细胞凋亡无显著差异；Per2在其高表达时间点肿瘤细胞的凋亡明显高于其低表达时间点，而此时间点的正常脑组织细胞凋亡无显著差异。结论：本实验证实了Per1、Per2基因在大鼠体内胶质瘤细胞中的表达节律为12小时，正常组织中的表达节律为24小时。肿瘤组织中高表达的Per基因能够诱导肿瘤细胞对电离辐射的敏感性，抑制肿瘤组织细胞的的增值，促进肿瘤组织的凋亡。同时也初步摸索了胶质瘤对射线的敏感节律性，为胶质瘤时间治疗在放射治疗上的运用提供了理论依据，为胶质瘤的综合治疗提出了一个全新的思路。