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目的:1、探讨Saps酶抑制剂利托那韦(RIT)对白念珠菌毒力因子Saps活性的影响。2、探讨利托那韦联合唑类药物氟康唑(FCA)对游离状态及生物膜状态下白念珠菌的体外药物敏感性。3、探讨白念珠菌毒力因子SAP2、靶酶基因ERG11突变/高表达与唑类药物耐药的关系。方法:1、选取山西医科大学第二医院皮肤病性病科真菌实验室已鉴定的白念珠菌50株,在含有不同浓度利托那韦的BSA培养基中检测毒力因子Saps的活性,探究利托那韦是否影响白念珠菌毒力因子Saps的活性,进而影响白念珠菌的毒力致病。2、采用美国临床实验室标准化研究所(Clinical Laboratory and Standards Institute,CLSI)推荐的M27-A4微量稀释法对临床白念珠菌株进行利托那韦联合FCA体外药敏试验,探究游离状态和生物膜状态下,利托那韦联合FCA作用于白念珠菌是否会产生增敏效应。3、提取白念珠菌毒力因子SAP2、靶酶基因ERG11基因组DNA并测序,寻找突变位点,并通过RT-PCR检测二者的mRNA表达水平,探讨毒力因子SAP2、靶酶基因ERG11突变/高表达与白念珠菌唑类药物耐药的关系。结果:1、RIT对白念珠菌毒力因子Saps活性的影响:RIT浓度为2μg/mL(0.697±0.093)、8μg/mL(0.800±0.075)、32μg/mL(0.856±0.08)时,白念珠菌SAP2活性均低于空白对照组(0.631±0.083),差异有统计学意义,F=74.06,P<0.05。2、RIT联合FCA体外药敏试验结果:游离状态下,联合RIT后FCA的MIC50中位数由4μg/mL降至2μg/mL,差异无统计学意义,z=0.7997,P>0.05,增敏率为0;生物膜状态下,联合RIT后FCA的MIC50中位数由32μg/mL降至16μg/mL,差异无统计学意义,z=0.7342,P>0.05,增敏率为0。3、SAP2基因突变/表达:(1)SAP2测序结果与标准序列对比未发现碱基突变位点;(2)SAP2 mRNA相对表达量:敏感菌株组1.715±0.576,交叉耐药菌株组5.380±1.39,FCA耐药菌株组3.879±1.125,ITR耐药菌株组4.385±1.02,VRC耐药菌株组3.534±1.162,差异有统计学意义,F=15.23,P<0.001。4、ERG11基因突变/表达:(1)ERG11测序结果与标准序列对比发现23处碱基突变位点,其中同义突变17处,错义突变6处(D116E、T123I、K128T、Y132H、V488I、A516P),敏感组和耐药组均发现错义突变D116E,余错义突变均发现于耐药组,其中A516P为本实验新发现的突变位点;(2)ERG11 mRNA相对表达量:敏感菌株组1.019±0.305,交叉耐药菌株组5.117±1.372,FCA耐药菌株组4.712±0.785,ITR耐药菌株组4.498±1.092,VRC耐药菌株组4.102±0.611,差异有统计学意义,F=32.58,P<0.001;(3)耐药菌株组中错义突变组ERG11 mRNA相对表达量(4.06±0.65)低于非错义突变组(5.37±1.06),差异有统计学意义,t=4.1842,P<0.05。5、SAP2 mRNA表达量与ERG11表达量的相关性分析:相关系数r=0.6655,P<0.001。结论:1、RIT可以通过抑制白念珠菌毒力因子Saps的活性,降低白念珠菌的毒力致病。2、在体外RPMI1640液体培养基中,RIT可能不增加FCA对不同状态下白念珠菌的敏感性。3、临床分离白念珠菌耐唑类药物菌株中,未发现有毒力因子SAP2基因突变存在,但存在SAP2高表达;靶酶基因ERG11存在突变或高表达。毒力因子SAP2高表达、靶酶基因ERG11突变或高表达可能增加唑类药物的耐药性,且SAP2与ERG11之间存在正调节作用。