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ABA在植物生命周期中起着关键的作用,例如种子的休眠、萌发、幼苗的生长以及开花等。更重要的是,ABA使植物能够耐受与水相关的胁迫,例如干旱和盐度等。迄今为止,在ABA的信号传导途径中一些基本组分已经被鉴定,比如PROTEIN PHOSPHATASES TYPE 2Cs(PP2Cs),SUCROSENON-FERME-NTING 1-RELATED PROTEIN KINASEs(Sn RK2s)和ABA-RESPONSIVE ELEM-ENTS BINDINGFACTORs(ABFs)等。在2009年,在植物细胞中ABA受体PYRABACTIN RESISTANCE 1/PYR-LIKE/REG-ULATORY COMPONENTS OF ABA RECEPTORs(PYR1/PYLs/RCARs)被证明。当受到外源ABA诱导后,PYR1/PYLs/RCARs受体感知ABA并抑制PP2C的活性使Sn RK2去磷酸化,进而调控下游基因的表达。ABA信号转导通路中基本成分水平的严格控制对于稳态是至关重要的。最近,许多研究已经表明,这些中枢调节因子被泛素26S蛋白酶体系降解。在拟南芥基因组中已经发现了超过1400个编码E3连接酶的基因。这些基因可以分为两组:单亚基型和多亚单位型。F-box蛋白作为SCF复合体最重要的亚基是由快速扩增的真核基因家族编码,在N端包含有40-50个氨基酸组成的保守的F-box结构域,首先在细胞周期蛋白F中被发现并介导了与Skp1的相互作用。F-box蛋白在C端都包含一个或者多个高度可变的蛋白质-蛋白质相互作用结构域。在拟南芥和水稻基因组中分别有692和779个F-box蛋白序列被发现。但大多数F-box家族基因的功能还未知。本研究克隆了两个拟南芥F-box家族基因,对这两个基因在ABA信号传导途径中的功能进行了分析,主要研究结果如下:1.利用Infusion技术,克隆了FB1和FB2基因,成功将其构建到N-egad-LUC植物表达载体上。FB1和FB2基因组全长分别为2283 bp和1337 bp。FB1包含两个外显子和一个内含子,而FB2中不包含内含子。FB1和FB2具有典型的F-box结构域,并与油菜中FB1和FB2亲缘关系最近。2.通过农杆菌介导的蘸花侵染,将重组质粒转化到拟南芥中,利用Basta抗性筛选,Luminometer仪瞬时检测和Western Blot技术,证实得到了FB1和FB2的过表达转基因拟南芥,最终得到T3代纯合转基因植株。另外,从ABRC(Arabidopsis Biological Resource Center)购买到FB1和FB2的T-DNA插入突变体,利用三引物法,鉴定出纯合的突变体。3.利用Gateway技术构建了FB1-YFP融合表达载体,并瞬时转染了拟南芥原生质体进行亚细胞定位分析,结果表明FB1蛋白定位于细胞质和细胞核中。4.分别对FB1和FB2过表达拟南芥株系进行ABA响应表型分析,结果表明FB1和FB2过表达拟南芥种子的萌发率明显高于野生型的,对ABA表现出不敏感,并随着ABA浓度的增加表型更加显著。5.在FB1和FB2过表达以及野生型中,分析ABA相关基因的转录水平,发现FB1和FB2过表达引起ABA信号转导负向调节因子ABI1、ABI2的转录水平升高,正向调节因子ABI3、ABI4的表达量下降;但是如ABF转录因子、Sn RK2和ABI5等ABA信号正向调节因子的表达量出现上调,推测可能存在FB1和FB2降解靶蛋白引起了蛋白水平下降而诱导mRNA转录升高的反馈。