【目的】
　　本研究的目的是利用实验室现有的胶原制备技术，通过适当优化工艺制备性能更好的胶原，并选择EGCG与胶原结合后制备一种用于预防或治疗紫外引起的皮肤光老化的制剂产品，研究其是否具有协同抵抗皮肤光老化的作用。通过体内体外实验研究该制剂的作用效果，为后期企业生产相关制剂产品提供基础。
　　【方法】
　　1.以牛跟腱为原料，采用醋酸与胃蛋白酶结合法提取Ⅰ型胶原蛋白并检测其性能。通过紫外光谱检测和SDS-PAGE凝胶电泳法检测胶原蛋白的结构及纯度。通过OH自由基、DPPH自由基和ABTS自由基清除率测试，评估胶原和EGCG的抗氧化活性。
　　2.创建紫外辐射引起的小鼠成纤维细胞光老化模型，并应用该制剂产品处理细胞，通过MTT实验，以及检测ROS、SOD、GSH-Px等指标，在体外细胞层面评估该制剂抗紫外光老化的作用效果。
　　3.创建紫外辐射引起的裸鼠皮肤光老化模型，并应用该制剂产品涂抹于裸鼠皮肤，通过皮肤组织染色、抗氧化指标检测、ELISA、WB等方法，评估该制剂保护皮肤免受紫外损伤的作用效果。
　　【结果】
　　1.从牛跟腱中提取的胶原蛋白的紫外光谱具有与Ι型胶原蛋白相符的特征吸收峰，在SDS-PAGE凝胶电泳图中，提取的胶原蛋白具有Ι型胶原蛋白特有的三条谱带，没有其他杂带。证明所提取的胶原蛋白为Ι型胶原蛋白，且胶原蛋白纯度较高。通过检测OH自由基、DPPH自由基、ABTS自由基清除率，结果表明胶原本身的抗氧化能力有限，而EGCG具有很强的抗氧化性。选择将两者结合研究其是否具有协同抵抗皮肤光老化的作用。
　　2.细胞实验表明，胶原、EGCG及胶原EGCG结合在紫外辐射前和紫外辐射后处理细胞，细胞的形态数量都比紫外模型组有了明显好转。三组药物制剂的使用都能降低光老化细胞内ROS的水平从而减轻氧化损伤，增加细胞抗氧化酶的活力，起到预防和减缓紫外辐射引起的皮肤光老化的作用。胶原EGCG结合制剂在紫外辐射前能起到保护细胞，降低UVB对细胞造成的损伤，在紫外辐射后也能起到修复细胞，减轻氧化应激损伤的作用。在本次细胞实验中，与单独使用胶原或EGCG制剂相比，胶原与EGCG结合制剂并没有表现出明显的优势，但综合效果更为全面。
　　3.动物实验表明，单独使用EGCG制剂或胶原制剂在保护皮肤方面有一定的作用，而胶原EGCG结合制剂的保护皮肤免受UVB导致的皮肤光老化的作用更为优异与全面。胶原EGCG结合制剂能维持皮肤胶原纤维的排列及完整性，使SOD和GSH-Px的活性维持在相对高的水平，减少脂质过氧化物MDA的产生。同时使皮肤组织中MMP-1和TNF-α的含量维持在相对低的水平，下调MMP-1和TNF-α的表达，起到良好的抗光老化效果。综合结果显示，胶原EGCG结合制剂的效果最为显著也最全面。
　　【结论】
　　胶原的抗氧化活性并不强，EGCG具有很强的抗氧化活性。胶原与EGCG结合后应用于皮肤，表现出了协同抵抗皮肤光老化的效果，作用强于单独使用胶原或EGCG制剂。可以作为后期生产相关产品的基础。