帕金森病（Parkinson’s disease,PD）的主要病理特征是黑质（subtantia nigra,SN）多巴胺（dopamine,DA）能神经元的选择性丢失和残存的神经元内出现以α-突触核蛋白为主要成分的路易小体。目前对于PD的治疗多集中于药物治疗上，如：左旋多巴、DA激动剂和单胺氧化酶B（MAO-B）抑制剂等，但这类药物的毒副作用尚未得到解决。因此，寻找安全有效的药物来治疗或延缓PD的发展已成为当务之急。有研究发现，黄连素对PD模型具有保护作用，然而确切的保护机制仍不清楚。因此，本实验选择SH-SY5Y细胞系以及C57BL/6小鼠建立PD细胞及动物模型，采用分子生物学、行为学、免疫组织化学等多种研究方法，探讨黄连素对PD的保护作用及其可能的机制。实验结果如下：
　　1.不同浓度的黄连素（0、10-5、10-4、10-3、10-2、10-1、1、10、100μM）处理SH-SY5Y细胞24h，低于1μM的黄连素处理，对细胞存活率无影响；但当黄连素浓度至10μM以上时，细胞存活率显著降低。20μM鱼藤酮处理细胞24h，细胞存活率降至65%（P＜0.001），10-3μM-1μM黄连素与鱼藤酮共处理，可显著提高细胞存活率，其中10-1μM黄连素的作用最强（P＜0.001）。因此，选取10-1μM黄连素进行后续实验。
　　2.与对照组相比，鱼藤酮处理组细胞内线粒体膜电位（mitochondrial transmembrane potential,Δψm）水平显著降低，氧自由基（reactive oxide species,ROS）显著增加（P＜0.001）。与鱼藤酮处理组相比，黄连素预处理抑制了Δψm下降（P＜0.01）以及ROS增加（P＜0.05）。
　　3.与对照组相比，鱼藤酮处理组Bcl-2/Bax的比值下降，caspase-3蛋白表达上调（P＜0.001）。黄连素预处理抑制了Bcl-2/Bax比值的下降（P＜0.05），抑制caspase-3的表达（P＜0.001）。
　　4.与对照组相比，鱼藤酮处理组细胞内磷酸化Akt蛋白表达显著下调（P＜0.001）。黄连素预处理可抑制鱼藤酮诱导的Akt磷酸化蛋白水平的降低（P＜0.05）。不同处理组相比，Akt总蛋白的表达无显著性差异（P＞0.05）。
　　5.爬杆实验显示，与正常对照小鼠相比，MPTP处理组小鼠从杆顶部自由爬行到底部的时间增加（P＜0.001）。黄连素预处理组小鼠爬杆时间与MPTP处理组小鼠相比明显减少（P＜0.01）。转棒实验显示，MPTP处理组小鼠在转棒上停留时间与对照小鼠相比明显减少（P＜0.001）。黄连素预处理组小鼠在转棒上停留的时间与MPTP处理组小鼠相比明显增加（P＜0.01）。
　　6.与对照组相比，MPTP处理组小鼠SN区酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase，TH）阳性细胞数明显减少（P＜0.001）。黄连素预处理组小鼠SN区TH阳性细胞数与MPTP处理组小鼠相比明显增加（P＜0.001）。
　　7.与对照组相比，MPTP处理组小鼠SN区TH蛋白表达水平明显降低（P＜0.001），α-突触核蛋白的蛋白表达水平明显升高（P＜0.001）。黄连素预处理组SN区TH蛋白表达水平与MPTP处理组相比明显升高（P＜0.01），α-突触核蛋白的蛋白表达水平与MPTP处理组相比明显下降（P＜0.001）。
　　8.与对照组相比，MPTP处理组小鼠SN区微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein light chain3-Ⅱ，LC3-Ⅱ）表达上调（P＜0.05），p62蛋白表达上调（P＜0.001）。黄连素预处理小鼠SN区LC3-Ⅱ蛋白表达水平与MPTP处理组相比明显升高（P＜0.001），p62蛋白表达水平与MPTP处理组相比明显降低（P＜0.01）。
　　9.与对照组相比，MPTP处理组小鼠SN区腺苷5’-单磷酸（AMP）激活的蛋白激酶磷酸化蛋白（pAMPK）上调（P＜0.05）。黄连素预处理组小鼠SN区pAMPK蛋白与MPTP处理组相比明显升高（P＜0.001）。不同处理组之间AMPK的总蛋白表达无明显差异（P＞0.05）。
　　10.自噬抑制剂6-氨基-3-甲基嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）预处理可拮抗黄连素抑制MPP+诱导的细胞存活率降低的作用（P＜0.05）。AMPK抑制剂compound C（Dorsomorphin）预处理同样可以拮抗黄连素抑制MPP+诱导的细胞存活率降低的作用（P＜0.001）。单独应用3-MA或compound C对细胞存活率没有影响（P＞0.05）。
　　11.与黄连素和MPTP共处理组相比，3-MA预处理可抑制Δψm的升高（P＜0.001），ROS的降低（P＜0.05）。Compound C预处理同样可以拮抗黄连素恢复Δψm（P＜0.01），降低ROS水平的作用（P＜0.001）。
　　12.与黄连素和MPTP共处理组相比，3-MA预处理可抑制LC3-Ⅱ蛋白表达（P＜0.001），但对pAMPK表达没有影响（P＞0.05）。Compound C预处理可抑制LC3-Ⅱ蛋白表达（P＜0.001），抑制pAMPK蛋白表达（P＜0.001）。不同处理组之间AMPK的总蛋白表达无明显差异（P＞0.05）。
　　13.与黄连素和MPTP共处理组相比，3-MA预处理升高α-突触核蛋白的蛋白表达水平（P＜0.001）。Compound C预处理同样升高α-突触核蛋白的蛋白表达水平（P＜0.05）。
　　以上结果表明，黄连素能够通过抗氧化和激活Akt信号通路对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞产生保护作用。在动物实验中，黄连素预处理可显著改善由于MPTP所导致的小鼠SN区DA能神经元的变性死亡，改善小鼠运动功能障碍。黄连素还明显的抑制了α-突触核蛋白的积聚，并增强了LC3-Ⅱ相关的自噬，此作用可被自噬抑制剂3-MA或AMPK抑制剂compound C所阻断，提示黄连素的保护作用可能是通过AMPK依赖的自噬途径实现的。