枯草芽孢杆菌X2菌株的筛选与应用

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利用土壤稀释倒皿法,分析了大庆盐碱土壤中的各菌群关系;将分离获得的芽孢杆菌菌株与大豆菌核病菌和茄腐镰刀菌对峙培养,测定各细菌培养液对菌丝生长的抑制能力和对孢子萌发的影响,筛选得到生防菌X2菌株,根据生理生化指标鉴定和16S rDNA序列比对,确定X2菌株为枯草芽孢杆菌。通过测定X2菌株的生长量及其对大豆菌核病菌的生长抑制能力为标准,对其培养液碳源、氮源、无机盐和培养条件的优化,确定该菌产生抑菌活性物质最适条件为:牛肉膏3g/L、NaCl 5g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖3g/L、FeSO4 0.01g/L和MgSO40.2g/L,起始pH值为7.0~8.0、在250mL三角瓶中装液量为50-100mL、摇床转数150~175/rmin、培养温度31℃,培养时间为48h。菌丝生长抑制率测定结果证实:X2菌株发酵液过滤除菌后具有较高的抑制能力,但经121℃高温处理和去除发酵液中蛋白后其抑菌能力有所下降。发酵液在pH 5.5~10的范围内抑菌能力稳定。经大豆叶片离体接种证明,X2菌株能有效延缓大豆离体叶片上接种的大豆菌核病菌的侵染。在盆栽土壤中添加X2菌株、解磷细菌、解钾细菌后,测定植株的生长情况,并在第4复叶上接种大豆菌核病菌24h后,测定大豆根部、第1复叶、第3复叶的PAL、POD和PPO的活性,结果表明土壤中施入供试细菌后,大豆植株的株高、根瘤数和植株干重均高于对照;大豆植株根部和不同部位的复叶的PAL活性、PPO活性、PPO酶活性也有变化,X2菌株在提高植株防御酶系活力方面的作用效果比较突出。在大豆花期,分离计量各处理土壤中微生物数量,测定各处理土壤的相关土壤酶活性表明,土壤中真菌的数量有所减少,细菌和放线菌数量显著提高。在加入磷细菌、钾细菌和X2菌株后,对土壤中纤维素酶没有产生明显的影响,而土壤中的葡聚糖酶活力均提高显著,磷酸酶活性变化趋势与脲酶基本一致,均有较大的提高。
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