橙皮甙对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的影响

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目的:以人肺腺癌A549/DDP细胞株为受试对象,研究橙皮甙对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用及其细胞凋亡(apoptosis,APO)的影响,旨在进一步阐明橙皮甙的抗肿瘤机制,为其应用于肺癌的临床治疗提供更多的实验依据。方法:①通过细胞计数法来绘制A549和A549/DDP细胞的生长曲线;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT)来测定A549/DDP对顺铂(cis-platin,DDP)的耐药倍数;采用MTT法测定橙皮甙对A549和A549/DDP细胞的增殖抑制作用,计算出橙皮甙对两细胞系的半数抑制浓度,比较有无差异。②用接近半数抑制浓度的橙皮甙处理A549/DDP细胞24h后,经PI(propidium iodide, PI)荧光染料染色后,用流式细胞术(flow cytometric methods,FCM)分析细胞周期。③用0、6、12、24、48和96mg/L橙皮甙处理A549/DDP细胞24h后,在荧光显微镜下观察细胞形态学的变化及FCM检测细胞凋亡的情况。结果:①亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.68±0.11)h和(33.54±0.84)h,两组细胞数比较无统计学差异性(P>0.05);经DDP处理A549和A549/DDP细胞48h后,橙皮甙对A549/DDP细胞的抑制率明显高于对A549细胞的抑制率,两组比较有统计学差异性(P<0.05)。橙皮甙对A549和A549/DDP细胞的半数抑制浓度(50% concentration of inhibition,IC50)分别为12.68μmol/L和163.54μmol/L, A549/DDP细胞对DDP的耐药倍数为12.90。②用不同浓度的橙皮甙对A549/DDP细胞进行干预,在不同时间测得其对A549/DDP细胞的抑制率呈现了随着橙皮甙浓度的增加和(或)时间的延长橙皮甙对A549/DDP的抑制率增强,呈剂量时间依赖性。③用24mg/L的橙皮甙作用A549/DDP细胞24h后,实验组G2/M期和S期细胞数与对照组细胞数比较有统计学差异性(P<0.05),G0/G1期两组细胞数比较无统计学差异性(P>0.05)。④用不同浓度的橙皮甙处理A549/DDP细胞24h,染色后显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染,荧光成团块分布;经FCM检查凋亡细胞数所占的百分比,显示出明显的剂量依赖关系(P<0.05)。结论:①A549/DDP细胞基本保留了亲代细胞的生长特性,但相对于其亲代细胞系A549,确实对传统化疗药物DDP产生明显的耐药性。②橙皮甙对A549/DDP有生长抑制作用,并呈剂量、时间依赖性,A549/DDP对橙皮甙不具有耐药性。③橙皮甙可诱导A549/DDP细胞周期阻滞于G2/M期。④橙皮甙能诱导A549/DDP细胞凋亡。
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