前言 肝窦毛细血管化（sinusoid capillarization）是肝纤维化过程中一个重要的病理改变，而肝窦内皮下基底膜的形成是肝纤维化过程中肝窦毛细血管化的一个重要特征。目前对肝窦毛细血管化在非酒精性脂肪肝肝纤维化中的形成过程报道较少，有关基底膜的主要成分层粘连蛋白在肝纤维化过程中肝窦壁的动态变化尚缺乏系统的研究。我们用Buyssens的方法成功建立了高胆固醇血症家兔脂肪肝肝纤维化模型，采用免疫组化方法及透射电镜，动态观察家兔肝纤维化形成过程中肝窦壁的变化，以探讨肝窦壁毛细血管化与肝纤维化的关系。 材料与方法 一、动物分组与模型的建立 新西兰白种家兔40只随机分组，对照组15只，模型组25只。模型组动物给予高脂饲料喂养，即在普通饲料基础上加2％胆固醇，该剂量持续8wk，之后普通饲料喂养8wk；对照组给予普通饲料喂养，共16wk。于2wk、4wk、8wk，停药4wk及停药8wk末分别处死模型组家兔各5只及对照组家兔各3只，以进行相应病理学及透明质酸检测。 二、肝脏组织病理学检测 家兔腹腔麻醉后，经心脏灌流固定，从肝右叶中部切取肝组织，用40g·L^-1甲醛溶液固定。做HE染色及VG苦味酸染色，观察各组家兔肝细胞变性及肝纤维组织增生情况；做层粘连蛋白（Laminin，LN）免疫组织化学染色，观察其在肝纤维化过程中肝窦壁的动态变化。结果用病理图像分析仪分析，测定胶原纤维面积及层粘连蛋白面积百分比。另取肝组织，用乃 mg·t－‘戊＝醛溶液固定后，在透射电镜下观察肝组织超微结构的形态变化。 三。透明质酸（Hyaluromic acid，HA）测定 用放兔法观察肝窦内皮细胞损伤情况。 实验结果 一、肝脏组织病理学改变 1．光镜观察HE染色对照组可见正常中央静脉及放射状排列的肝板；模型组ZWk末出现轻度脂肪变性及点状坏死，4Wb出现中重度脂肪变性、炎性细胞浸润加重，SWk末坏死增多、炎性细胞浸润成团，停止造模后4Wb末及SWk末脂肪变、肝细胞坏死及炎性细胞浸润逐渐减轻。VG苦昧酸染色对照组可见中央静脉及汇管区有极少量的胶原纤维；模型组自2wk末胶原染色逐渐增加，于 8 Wb末 VG苦味酸染色终末静脉（包括中央静脉）壁增厚，胶原纤维向窦周间隙延伸，窦周纤维组织较前增加，停止造模后模型组胶原染色逐渐减弱，但至停药SWk末仍强于对照组。病理图像分析显示模型组胶原纤维面积百分比明显高于对照组h＜0．001人 2．电镜观察 对照组远侧胞质呈薄片状，有许多窗孔，内皮下缺乏基底膜。模型组加 末部分肝窦内皮细胞远侧胞质窗孔数减少，内皮下尚未见基底膜形成；4Wb末可见间隔近旁的肝窦内皮细胞远侧胞质窗孔减少或消失，内皮下已开始有不完全的基底膜形成；SWk末纤维间隔近旁肝窦内皮细胞远侧胞质窗孔数减少至消失，内皮下已有完整的基底膜形成；停药4Wb末肝组织内胶原纤维仍大量沉积，但肝窦内皮细胞远侧胞质失窗孔及内皮下基底膜形成程度有所减轻，内皮下基底膜成不连续状；停药SWk末，仍可见胶原柬，肝窦内皮失窗孔及内皮下基底膜形成明显减轻。 3．肝组织LN免疫组织化学染色结果LN在对照组家兔汇管区血管壁呈阳性表达，肝窦壁呈极微弱阳性。模型组家兔随着 ·2·肝纤维化的形成，肝窦壁阳性着色增强，swk末阳性最强；停止造模后阳性逐渐减弱，但至停药SWk末时仍强于对照组。图像分析结果模型组 LN面积百分比明显高于对照组h＜0．皿门。 二、血清透明质酸含量 模型组血清HA含量在Zwk末开始增高，以后随造模时间延长，至SWk末时达到高峰与对照组比较差异显著帅0．皿1人停止造模后家兔血清HA含量逐渐下降，停药SWk末时仍强于对照组。 讨 论 许多研究表明，各种原因所致的肝纤维化过程中一个显著的病理变化即为纤维间隔近旁肝窦毛细血管化，其形态学特点主要指肝窦内皮细胞远侧胞质失窗孔和内皮下基底膜形成，其中后者是肝窦毛细血管化的一个重要标志。肝窦毛细血管化减弱了肝细胞和血液之间的氧和营养物质的交换，最终导致肝纲胞萎缩和肝窦塌陷，同时影响各种物质的代谢，尤其是脂肪的代谢失衡，导致脂肪肝。而肝细胞的损伤会促使Disse间隙细胞外基质进一步沉积，加重肝纤维化向肝硬化转变，造成恶性循环。 本研究显示非酒精性家兔肝纤维化模型肝窦毛细血管化是逐渐形成的，肝窦内皮下基底膜出现在造模4Wb末纤维间隔形成以后，SWk末出现最为明显，以后随着造模的停止，基底膜可逐渐降解，停药SWk末明显减轻。电镜下肝窦内皮失窗孔早于纤维间隔的形成，而肝窦内皮下基底膜形成出现在纤维间隔形成以后，表明肝窦内皮窗孔数减少可能是高胆固醇饮食损伤肝细胞的始动环节，而肝窦内皮下基底膜的形成可能是纤维化形成过程中细胞外基质沉积的后果。 目前研究认为，一些物质＊ IV型胶原蛋白和 LN等)可调节肝窦内皮细胞的窗孔，影响毛细血管化的形成。?