【摘 要】
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目的:探讨没食子酸（Gallic,GA）对烟曲霉菌性角膜炎的抗真菌和抗炎作用及其潜在机制。方法:1.体外采用CCK-8细胞毒性实验测定没食子酸对永生化人角膜上皮细胞（HCECs）的毒性,体内采用Draize实验测定没食子酸对小鼠角膜的毒性。2.体外采用最低抑菌浓度实验、生物膜形成实验、真菌粘附实验、菌丝荧光白染色、碘化丙啶摄取试验评估没食子酸的抗真菌作用。3.建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,使用没食
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目的:探讨没食子酸（Gallic,GA）对烟曲霉菌性角膜炎的抗真菌和抗炎作用及其潜在机制。方法:1.体外采用CCK-8细胞毒性实验测定没食子酸对永生化人角膜上皮细胞（HCECs）的毒性,体内采用Draize实验测定没食子酸对小鼠角膜的毒性。2.体外采用最低抑菌浓度实验、生物膜形成实验、真菌粘附实验、菌丝荧光白染色、碘化丙啶摄取试验评估没食子酸的抗真菌作用。3.建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,使用没食子酸或磷酸盐缓冲液（PBS）以滴眼方式进行局部治疗,一天3次,利用裂隙灯照相、临床评分评估没食子酸的治疗效果;采用高碘酸-希夫（PAS）染色以及苏木精-伊红（HE）染色评估没食子酸在体内的抗真菌或抗炎的治疗效果。4.对小鼠角膜切片进行免疫荧光染色,观察没食子酸对中性粒细胞募集、浸润的影响,并通过髓过氧化物酶（MPO）实验测定中性粒细胞的活性。5.采用RT-PCR、ELISA和Western blot检测动物及细胞烟曲霉菌炎症模型中促炎细胞因子（IL-1β、TNF-α、COX-2、LOX-1）及通路因子Nrf2/HO-1的表达。结果:1.100μg/m L没食子酸不影响HCECs细胞活力且对小鼠角膜无毒性作用,因此该浓度可应用于后续实验。2.体外抗菌实验,100μg/m L没食子酸能够显著抑制烟曲霉菌的生长、生物膜的形成、孢子的粘附,并增加真菌细胞膜的通透性。3.在小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型中,100μg/m L没食子酸点眼后能够显著改善小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度;PAS染色表明没食子酸治疗后的小鼠角膜中真菌载量明显减少,HE染色显示没食子酸治疗后小鼠角膜的炎症程度明显降低。4.免疫荧光染色结果提示没食子酸可减轻烟曲霉菌性角膜炎中性粒细胞募集、浸润,MPO结果显示没食子酸可降低中性粒细胞活性。5.没食子酸可降低体内、外实验炎症反应中的炎症因子IL-1β、TNF-α、COX-2、LOX-1在基因及蛋白水平的表达;同时没食子酸可升高Nrf2和HO-1的表达,在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中发挥治疗作用。结论:在烟曲霉菌性角膜炎中,100μg/m L没食子酸能够充分地发挥抗菌抗炎作用。没食子酸通过减少烟曲霉菌菌丝形成、增加细胞膜通透性、降低孢子粘附等发挥抗菌作用;通过减少中性粒细胞的募集和浸润、下调促炎细胞因子的表达减轻烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应,其抗炎作用可通过下调LOX-1并增强Nrf2/HO-1信号通路表达实现。
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