论文部分内容阅读
新疆杨和银白杨×新疆杨是在西北地区广泛种植的杨树品种，利用基因工程技术开展抗盐转基因研究，培育抗盐杨树新品种对西北地区生态环境和经济建设有着重要的意义。 本研究利用农杆菌菌株AGL1介导AhBADH基因，通过叶盘法转化新疆杨和银白杨×新疆杨，共获得新疆杨Km~r植株转基因植株17株，银白杨×新疆杨Km~r转基因植株21株。本研究对银白杨×新疆杨的组培再生体系进行优化，结果表明试验采用1／2MS BA0.25mg／L+TDZ0.002或0.004mg／L+IAA0.5mg／L为分化培养基时叶盘的分化率较高，可达到90.3％和78.1％。同时本实验优化了生根培养基配方，得出采用卡拉胶为凝固剂，1／2MS，IBA0.2mg／L生根率可达到100％。在此基础上，基本建立了高频的植物组培再生体系。 本实验研究了Km对银白杨×新疆杨叶盘分化得影响，实验结果显示，当Km加至15mg／L时叶盘未分化出芽，所以采用Km15-20mg／L筛选叶盘；对于叶柄，当Km加至25mg／L时其不能分化出芽，以此作为最低浓度筛选叶柄。为进一步加强筛选强度，本实验研究了Km对生根的影响，结果显示当Km加至10mg／L时，植株无法生根，因此可采用Km10mg／L进行生根时期的筛选。 通过银白杨×新疆杨的遗传转化体系进行了摸索，结果显示在共培养时加入乙酰丁香酮100mg／L及侵染15-20min，使用较高的细胞分裂素TDZ0.004mg／L时银白杨×新疆杨的转化率最高。另且用菌液直接侵染时得效果不佳。本实验共筛选叶盘3341片，得到抗性芽15个，转化率可达0.5％。 对新疆杨的Km~r植株进行了PCR检测，结果显示在17株抗性植株中有两棵是阳性植株。用1，3引物对新疆杨Km~r植株进行PCR扩增时发现了特异的条带。在用2，3引物扩增BADH基因3′端部分序列时，发现了所有的植株包括CK-都扩增出了特异的条带，且扩增出来的片段在300-400bp之间，而且在200bp的地方有一条模糊的条带CK-则没有这条条带。用1，2引物对银白杨×新疆杨转CpTI基因的植株进行PCR检测发现了特异的条带。 转基因植株的抗盐性测定正在进行中。