传统的治疗卵巢癌的方案对提高卵巢癌患者五年生存率的作用微乎其微,这种现状的产生源于大家对卵巢癌发生的分子机制不清楚。t RNA在蛋白质的翻译过程中有其重要的作用,调控t RNA修饰的酶类在肿瘤的进展中起着关键作用。hTRM9L是催化t RNA碱基摆动的酶,研究表明hTRM9L调控卵巢癌的生长及凋亡与转录抑制因子LIN9相关,但具体机制不详。故本论文主要研究卵巢癌组织标本中hTRM9L的表达和hTRM9L对卵巢癌细胞增殖、周期、凋亡等生物学行为中的作用及其机制。第一部分:卵巢癌组织中hTRM9L及LIN9的表达及其相关性目的:检测卵巢癌组织及卵巢良性肿瘤组织中hTRM9L和LIN9的表达情况,了解hTRM9L和LIN9在卵巢癌组织中的相关性。方法:应用免疫组织化学技术方法检测卵巢癌组织及卵巢良性肿瘤组织中hTRM9L和LIN9的表达;采用配对T检验分析hTRM9L和LIN9在卵巢癌组织及良性肿瘤组织中表达的差异性;采用Pearson相关系数法分析hTRM9L和LIN9间的相关性。结果:免疫组织化学技术结果揭示:卵巢癌组织中hTRM9L和LIN9表达的阳性率分别为38.6%(27/70),41.4%(29/70);卵巢良性肿瘤组织中hTRM9L和LIN9表达的阳性率分别为61.4%、58.6%;hTRM9L的表达与LIN9表达的相关系数r为0.41(p<0.05)。结论:在卵巢癌中,hTRM9L可能为抑癌基因;在卵巢癌的发生发展过程中,hTRM9L和LIN9具有一定的协同作用。第二部分:人hTRM9L基因重组慢病毒载体的构建及慢病毒的制备目的:构建hTRM9L基因慢病毒表达载体,并包装成能转染目标细胞的慢病毒颗粒。方法:根据hTRM9L引物序列采用PCR法扩增其编码区DNA片段,经酶切线化后插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-Puromycin的MCS区域,构建慢病毒表达载体;包装成重组慢病毒颗粒,经逐孔稀释法行滴度鉴定。结果:经琼脂糖凝胶电泳和DNA序列鉴定,稳定表达hTRM9L重组慢病毒载体Ubi-hTRM9L-EGFP-Puromycin构建成功且获得病毒滴度为2×108TU/ml的重组慢病毒LV-hTRM9L及病毒滴度为4×108TU/ml TU/ml的对照病毒LV-Con。结论:成功构建稳定表达hTRM9L的慢病毒在日,为研究hTRM9L对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其机制奠定良好基础。第三部分:稳定表达hTRM9L基因对卵巢癌细胞增殖、周期、凋亡的影响目的:研究稳定表达hTRM9L基因对卵巢癌细胞HO8910PM的生长情况、周期阻滞情况及凋亡程度等的影响。方法:慢病毒感染卵巢癌细胞HO8910PM后,用荧光显微镜观察重组慢病毒LV-hTRM9L的感染效率;用RT-PCR和WB等技术检测hTRM9L基因和蛋白表达是否比对照组增加;用CCK-8法检测感染慢病毒后的细胞生长情况;细胞周期的分布及凋亡程度则采用流式细胞术。结果:HO8910PM细胞经慢病毒载体LV-hTRM9L转染72 h后,荧光显微镜观察显示LV-hTRM9L对HO8910PM细胞的感染效率在95%以上;慢病毒转染HO8910PM细胞后,细胞中hTRM9L在基因和蛋白量的水平均比对照组增加;慢病毒LV-hTRM9L介导的hTRM9L稳定高表达能显著地抑制HO8910PM细胞的增殖,流式结果显示hTRM9L使卵巢癌细胞周期阻滞在G1期,且使实验组细胞凋亡比率增加。结论:重组慢病毒LV-hTRM9L能高效地感染HO8910PM细胞,并能显著稳定地介导hTRM9L基因过表达;使卵巢癌细胞周期阻滞在了G1期,诱导卵巢癌细胞凋亡,通过这两个方面使卵巢癌细胞HO8910PM的生长减缓。