磷霉素是一种磷酸烯醇丙酮酸类似物,对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有广谱杀菌活性,常用于治疗由产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）和产碳青霉烯酶肠杆菌所引起的非复杂性尿路感染。fosA基因目前是引起肠杆菌对磷霉素耐药的最常见耐药基因,可位于质粒或染色体上。大肠杆菌所携带的质粒介导的fosA基因大多来源于其他肠杆菌,如克吕沃尔氏菌属（fosA3、fosA4）、克雷伯氏菌属（fosA5、fosA6和fosA9）和莱克氏菌属（fosA8）。本研究从一株产ESBL的大肠杆菌中发现了一个来源于肺炎克雷伯菌染色体的新型可转移磷霉素耐药基因fosA10。本研究对2011～2014年从广州市分离到的983株不同来源（人源393株、动物源362株和食品源228株）产ESBL大肠杆菌,以及2018年从巴基斯坦分离的9株鸡肉源产ESBL大肠杆菌,采用琼脂稀释法检测其对磷霉素的敏感性。结果显示,182株广州不同来源以及1株巴基斯坦鸡肉源产ESBL大肠杆菌对磷霉素耐药。采用PCR对所有磷霉素耐药菌株进行fos基因（fosA1～fosA7以及fosC2）的检测,结果182株广州源大肠杆菌全部扩增出fosA3基因,巴基斯坦源大肠杆菌PK9未检测到fosC2或fosA基因。将PK9与E.coli C600进行接合实验,成功获得磷霉素耐药接合子,提示该菌携带的磷霉素耐药基因位于可接合质粒上。对大肠杆菌PK9进行全基因组测序,结果显示PK9基因组长度为5.4 Mb,属于ST38,并携带3个质粒。在一个53 kb的Inc FII型（F35:A-:B-）质粒p HNPK9-FOS上,发现了一个420 bp的基因编码FosA6样蛋白,与其它已报道的磷霉素酶FosA1～FosA9的氨基酸序列有56.1%～98.6%的同源性。将此基因克隆至p MDTM19-T载体并转入E.coli DH5α,结果显示其转化子表现出高水平的磷霉素耐药性（MIC＞128μg/m L）,证实该基因可介导磷霉素耐药,因此命名为fosA10。对fosA10的基因环境进行分析,发现fosA10基因的两侧均存在与其反向的IS10插入序列,形成一个转座子（IS10-fosA10-IS10）,且转座子插入位置的两端各有9 bp的反向重复序列,提示fosA10通过与IS10组成转座子转移到质粒pHNPK9-FOS。经BLAST比较分析,发现fosA10基因及其上下游序列共1670 bp与Gen Bank数据库中的18株肺炎克雷伯菌染色体上的基因序列有100%的核苷酸同源性,提示该基因起源于肺炎克雷伯菌染色体基因。对182株广州市不同来源产ESBL的磷霉素耐药大肠杆菌进行fosA10基因的PCR检测,结果未检测到fosA10基因。尽管肺炎克雷伯菌染色体均携带固有的fosA基因,但不同肺炎克雷伯菌菌株表现的磷霉素耐药水平差异比较大。为探讨肺炎克雷伯菌染色体上的各种fosA基因是否可介导大肠杆菌不同的磷霉素耐药表型,将12株具有不同磷霉素耐药水平的蔬菜源肺炎克雷伯菌染色体上的fosA基因片段连接至pMDTM19-T载体并转入E.coli DH5α中,进行药物敏感性检测。结果显示,部分fosA基因在肺炎克雷伯菌和大肠杆菌中的耐药水平相近,但有些fosA基因在两种不同菌种中却表现出较大的耐药水平差异。综上所述,本研究在大肠杆菌中发现了一种新型的磷霉素耐药基因fosA10,该fosA10基因与IS10插入序列形成转座子,插入Inc FII型质粒并转移至大肠杆菌中。由于肺炎克雷伯菌染色体上的fosA基因很可能再次通过可移动元件水平转移到大肠杆菌等其他肠杆菌中并通过质粒传播,我们应警惕新的质粒介导fosA基因的再次出现,并加强对人类和动物磷霉素使用的监管,以防止磷霉素耐药性的进一步蔓延。