【摘 要】
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背景和目的:慢性阻塞性肺疾病（COPD）是具有高死亡率的临床慢性呼吸系统疾病。近年来的研究显示,COPD与细胞衰老的关系密不可分。由此可见,从细胞衰老入手可能能找寻出治疗COPD的靶点。文献表明,SIRT1是一种高度保守的抗衰老酶,调节SIRT1的活性可能在细胞衰老中发挥至关重要的作用。p97是泛素化-蛋白酶体途径中的重要组成部分。基于此,我们认为:p97可能通过SIRT1去乙酰化酶活性调节来影响
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背景和目的:慢性阻塞性肺疾病（COPD）是具有高死亡率的临床慢性呼吸系统疾病。近年来的研究显示,COPD与细胞衰老的关系密不可分。由此可见,从细胞衰老入手可能能找寻出治疗COPD的靶点。文献表明,SIRT1是一种高度保守的抗衰老酶,调节SIRT1的活性可能在细胞衰老中发挥至关重要的作用。p97是泛素化-蛋白酶体途径中的重要组成部分。基于此,我们认为:p97可能通过SIRT1去乙酰化酶活性调节来影响SIRT1的作用,从而影响肺上皮细胞的衰老。本实验中,我们将通过构建p97低表达载体,观察p97对肺上皮细胞衰老的影响,阐明p97在肺上皮细胞衰老的分子机制。方法:本课题中,我们首先采用香烟提取物（CSE）建立COPD的细胞模型,并通过SA-β-gal染色和Western blot检测p53、p21等衰老相关指标。在此基础上,构建p97低表达载体,通过SA-β-gal染色和Western blot的方法检测敲低p97前后的衰老指标影响;然后,我们通过放线菌酮实验来检测SIRT1的稳定性;通过ELISA方法对SIRT1去乙酰化酶活性进行检测,通过Western blot检测p53和FOXO3a的表达水平,进一步检测SIRT1去乙酰化酶活性的变化对p53和FOXO3a表达的影响。结果:1.与Control组相比,Model组中β-半乳糖苷酶染色阳性率值明显升高（P＜0.05）,而采用si-p97进行干预后,与Model组相比SA-β-gal染色阳性率明显降低,而p97拯救实验则抑制了si-p97的这一作用;2.与Control组相比,Model组中p53和p21表达水平显著上升（P＜0.05）,si-p97明显抑制了CSE中的p53和p21表达（P＜0.05）,p97拯救后干预了si-p97对p53和p21表达的影响（P＜0.05）;3.加入放线菌酮0、6、12 h后,与Control组相比,Model组中SIRT1的半衰期缩短（P＜0.05）,p97敲低组SIRT1的半衰期明显延长（P＜0.05）,而p97拯救组则干预了p97敲低组的作用（P＜0.05）;4.与Control组相比,Model组SIRT1的去乙酰化酶活性下降（P＜0.05）,p53表达上升（P＜0.05）,FOXO3a表达下降（P＜0.05）;与Model组相比,p97敲低组去乙酰化酶活性上升（P＜0.05）,p53表达下降（P＜0.05）,FOXO3a表达上升（P＜0.05）;p97拯救组则干预了p97敲低组的作用（P＜0.05）;5.p97干预前后,SIRT1表达未见显著差异（P＞0.05）。结论:p97可能通过下调SIRT1稳定性、降低SIRT1去乙酰化酶活性从而促进了肺上皮细胞衰老。
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