实验目的:骨肉瘤是一种恶性程度很高的骨肿瘤,它在早期极易转移,这个原因导致骨肉瘤患者的预后很差。灵芝在我国是一种常用的传统中药,之前的研究报道它有抑制多种肿瘤的进展的作用。因此,我们希望研究破壁灵芝孢子粉的水提取物(BSGLWE)对骨肉瘤的作用及其潜在的分子机制。实验方法:采用细胞增殖活性检测试剂盒,集落成型实验和流式细胞术检测BSGLWE在体外对骨肉瘤细胞增殖的影响。骨肉瘤细胞的迁移能力通过细胞划痕实验和transwell实验方法进行分析评估。然后通过透射电子显微镜(TEM)来观察高倍镜下细胞凋亡和自噬过程。接着,应用蛋白印迹和免疫荧光方法探索BSGLWE对骨肉瘤细胞作用的潜在信号通路。最后,在异种移植原位肿瘤模型中,通过免疫组化(IHC)分析评估肿瘤细胞中相关蛋白的表达,依据体内生物发光成像系统测量的实验动物活体发光强度来评价BSGLWE在体内对骨肉瘤进展的抑制效果。实验结果:BSGLWE能够在体外抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移,而且具有剂量依赖性,此外BSGLWE还能将肿瘤细胞的细胞周期阻滞在G2/M期。之后,与细胞凋亡相关的蛋白表达量的变化意味着BSGLWE能够诱导骨肉瘤细胞进行caspase依赖性细胞凋亡。另一方面,TEM结果表明BSGLWE的确促进两种不同的骨肉瘤细胞株HOS和U2细胞形成更多的凋亡小体和自噬体。蛋白印迹技术和免疫荧光试验以及拯救实验的数据分析表明,BSGLWE可以通过诱导自噬过程的起始阶段并且阻碍自噬小体的降解来增加自噬体的积累从而阻断细胞自噬过程。BSGLWE不仅可以抑制小鼠模型中的骨肉瘤进展,而且能在体内诱导骨肉瘤细胞凋亡并阻断自噬。实验结论:BSGLWE抑制骨肉瘤的进展。