【摘 要】
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目的:大鼠脑缺血再灌注损伤的模型是大脑中动脉栓塞（MCAO）,观察异氟烷后处理对脑缺血再灌注损伤神经元焦亡程度的作用,同时应用肌细胞增强因子2D（myocyte enhancer factor 2D,MEF2D）shRNA特异性敲低大鼠双侧海马区MEF2D的表达,探讨MEF2D在异氟烷后处理调控脑缺血再灌注损伤大鼠神经元焦亡的作用,为临床上麻醉用药提供参考。方法:使用成年SD大鼠制备大脑中动脉栓塞
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目的:大鼠脑缺血再灌注损伤的模型是大脑中动脉栓塞（MCAO）,观察异氟烷后处理对脑缺血再灌注损伤神经元焦亡程度的作用,同时应用肌细胞增强因子2D（myocyte enhancer factor 2D,MEF2D）shRNA特异性敲低大鼠双侧海马区MEF2D的表达,探讨MEF2D在异氟烷后处理调控脑缺血再灌注损伤大鼠神经元焦亡的作用,为临床上麻醉用药提供参考。方法:使用成年SD大鼠制备大脑中动脉栓塞的模型,脑缺血时间为90分钟,再灌注24小时,在再灌注的即刻大鼠吸入异氟烷1小时。使用改良神经行为学评分评估大鼠神经行为功能的损伤,TTC染色评估大鼠脑梗死体积,穿梭箱被动回避实验评估大鼠学习记忆功能,扫描电镜观察神经元焦亡严重情况,使用免疫荧光染色、蛋白质免疫印迹技术检测caspase-1,GSDMD,IL-18和MEF2D蛋白的表达水平,使用实时定量聚合酶链式反应技术检测caspase-1,GSDMD,IL-18和MEF2D m RNA的表达水平。特异性敲低大鼠海马区MEF2D表达的方法是造模前14天在大鼠双侧海马区注射MEF2D shRNA。结果:（1）与脑缺血再灌注损伤组（M）相比,异氟烷后处理组（MI）大鼠神经行为学损伤评分较低和脑梗死体积均较低（P<0.05）,且海马区GSDMD、IL-18蛋白的表达水平和GSDMD m RNA、IL-18 m RNA表达水平比脑缺血再灌注损伤组较低（P<0.05）,而海马组织中caspase-1蛋白及caspase-1 m RNA表达水平与未进行异氟烷后处理的MCAO组相比无明显差异（P>0.05）,大鼠神经元细胞膜形成囊性小泡较少,胞质较清亮。（2）当大鼠双侧海马区MEF2D被特异性敲低后,再使用异氟烷对脑缺血再灌注损伤大鼠进行处理（RMI）时,使用异氟烷后处理的大鼠（RMI组）的神经行为功能评分、梗死体积与单纯敲低MEF2D组（RM组）大鼠相比无显著差异（P>0.05）,且焦亡相关关键蛋白IL-18的蛋白及m RNA表达无显著差异（P>0.05）,而caspase-1,GSDMD蛋白及caspase-1m RNA、GSDMD m RNA表达水平降低（P<0.05）,神经元细胞形态未有明显改变。（3）在异氟烷后处理之前在大鼠双侧海马区注射MEF2D shRNA（RMI）与单纯异氟烷后处理组（MI）大鼠相比,注射了MEF2D shRNA的RMI组大鼠的脑组织梗死体积偏大、神经行为学障碍评分更高、神经元损伤更严重和IL-18蛋白及IL-18 m RNA的表达及分泌水平更高（P<0.05）,而caspase-1和GSDMD蛋白及caspase-1 m RNA、GSDMD m RNA表达及释放水平无统计学差异（P>0.05）,大鼠神经元胞质浓缩,细胞膜连续性中断。（4）MEF2D shRNA载体组（VM组）与M组相比,MEF2D的表达无统计学差异（P>0.05）,caspase-1、GSDMD和IL-18蛋白水平表达也无显著差异（P>0.05）。结论:在脑缺血再灌注模型中,异氟烷后处理可以通过减轻神经元焦亡现象从而发挥脑保护作用,并且MEF2D可以通过调控焦亡信号通路下游分子IL-18的表达水平从而参与这一进程。
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