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研究背景及目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,三阴性乳腺癌(TNBC)由于其恶性程度高、预后差等特点,成为研究的热点。溶瘤病毒是一类天然存在或经过人工改造后的病毒,能选择性感染并裂解肿瘤细胞,从而发挥抑制肿瘤生长的作用。为提高溶瘤病毒感染肿瘤细胞的靶向性,研究者常利用肿瘤特异性启动子构建病毒。细胞周期相关转录因子E2F-1在肝癌、肺癌等实体瘤中高表达,利用这一特点,设计以E2F-1作为启动子的溶瘤病毒在肝癌等的动物实验中取得了较好的抑瘤效果。这为乳腺癌的治疗提供了新思路,为提高溶瘤病毒的抗肿瘤作用、优化抗肿瘤免疫反应,研究者又常通过基因工程的手段,使病毒表达各类免疫调节因子,如IL-15,GM-CSF等。本研究拟构建E2F-1启动子、并表达IL-15的新型溶瘤腺病毒,并评价其对三阴性乳腺癌的治疗效果。研究方法:1、构建E2F-1启动子溶瘤腺病毒SG400-E2F1,构建可同时表达IL-15的溶瘤腺病毒SG400-E2F/IL15以及对照病毒SG400-EGFP。2、荧光显微镜观察SG400-EGFP感染三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常人胚肺成纤维细胞MRC-5的能力;MTT法比较不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)的病毒对这两种细胞的抑制作用;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病毒感染肿瘤细胞和正常细胞后上清液中IL-15的含量,蛋白质印迹(Western blotting)法检测细胞内IL-15蛋白的表达量。3、建立裸鼠三阴性乳腺癌的成瘤模型,应用活体内光学成像系统观察肿瘤生长情况。研究结果:1、成功构建溶瘤腺病毒SG400-E2F1和SG400-E2F/IL15。2、溶瘤腺病毒SG400-EGFP具有选择性;SG400-E2F/IL15对乳腺癌细胞有明显杀伤效应,而对正常细胞没有明显杀伤作用;SG400-E2F/IL15感染乳腺癌细胞后,IL-15的表达增多,而感染正常细胞后,IL-15表达维持在较低水平。3、裸鼠乳腺癌成瘤模型中,SG400-E2F/IL15治疗组肿瘤光子数、肿瘤体积均小于其他各组(P<0.05),治疗效果优于其他治疗组。研究结论:E2F-1启动子溶瘤腺病毒能选择性杀伤三阴性乳腺癌细胞,同时表达IL-15的溶瘤病毒SG400-E2F/IL15,具有更高的抗肿瘤作用。