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目的:1.建立同时测定痛泻要方破壁饮片及其传统饮片中芍药苷、升麻素苷、橙皮苷和苯甲酰芍药苷4种活性成分含量的方法,为痛泻要方破壁与传统饮片的质量标准的建立提供依据。2.比较痛泻要方破壁饮片及其传统饮片对大鼠小肠平滑肌收缩的抑制作用、以及对慢性避水应激大鼠肠道运动作用的异同,初步探讨其中的作用机制并对比痛泻要方破壁与传统饮片的药效学差异。方法:1.HPLC法测定痛泻要方破壁与传统饮片4种活性成分的含量以 Agilent Technologles HPLC Column ZORBAX SB-C18（4.6×250mm,Sμm）为色谱柱;以甲醇（A）-水（B）为流动相,梯度洗脱;流速:1mL·min-1;检测波长为230nm;柱温:35℃;进样量为10μL。采用HPLC法分别测定痛泻要方破壁与传统饮片中芍药苷、升麻素苷、橙皮苷和苯甲酰芍药苷4种活性成分的含量。2.痛泻要方破壁及传统饮片对大鼠小肠平滑肌收缩的抑制作用的钙动员机制采用离体小肠平滑肌测定方法,观察痛泻要方破壁与传统饮片（0.30、1.00、3.00、6.00、12.00、24.00、36.00、48.00、60.OOμg.mL-1）对大鼠离体小肠平滑肌自主收缩张力、频率和振幅的影响。3.痛泻要方破壁与传统饮片对慢性避水应激模型的干预作用和机制研究①通过慢性避水应激法建立慢性避水应激模型,设立空白对照组,模型对照组,匹维溴铵组,传统饮片组,痛泻要方破壁饮片低、中、高剂量组;②比较空白对照组和模型对照组之间的体重变化、排便情况;③采用双抗体夹心ELISA法检测大鼠血浆中与IBS-D相关的神经递质BDNF、VIP、SP和5-HT水平变化;④对各组大鼠结肠和大脑组织进行HE染色并观察其病理学变化;⑤采用免疫印迹法和免疫组织化学法测定结肠和大脑组织中5-HT3R蛋白的表达水平;免疫组织化学法测定结肠嗜铬细胞数目的变化。结果:1.HPLC法测定痛泻要方破壁与传统饮片4种活性成分的含量芍药苷、升麻素苷、橙皮苷和苯甲酰芍药苷的线性范围分别为20.00～640.00μg·mL-1（r2=0.9993）、5.00～160.00μg·mL-1（r2=0.9999）、16.25～600μg.mL-1（r2=0.9998）、2.03～65.00μg.mL-1（r2=0.9998）,检测限分别为 1.67、1.00、1.02、1.35μg·mL-1,定量限分别为 5.00、3.33、3.25、1.10μg.mL-1,精密度、稳定性（24h）和重复性试验的RSD值均<2%（n=6～7）,各成分的平均加样回收率为96.31%～102.79%（RSD为0.41～1.00%,n=3）。该方法简便、可靠、准确,并成功用于痛泻要方破壁与传统饮片中这4种活性成分的含量测定。2.痛泻要方及破壁饮片对大鼠小肠平滑肌收缩的抑制作用的钙动员机制与空白对照组相比,痛泻要方破壁与传统饮片能剂量依赖性地抑制大鼠离体小肠平滑肌的自主收缩,肌条张力、频率和振幅的抑制率均明显升高,且痛泻要方破壁饮片的抑制效果要优于传统饮片（P<0.05）。3.痛泻要方破壁与传统饮片对慢性避水应激模型的干预作用和机制研究①造模结束后,与空白对照组相比,模型对照组体重增长明显减小,体重的变化比较有统计学差异（P<0.05）;与空白对照组相比,模型对照组大鼠第1天、第5天和第10天应激期间排出的粪便数均显著性增多（P<0.05或P<0.01）。②经双抗体夹心ELISA法检测,模型对照组大鼠血浆中的BDNF、SP、5-HT水平均明显高于空白对照组大鼠的水平（P<0.05或P<0.01）,VIP水平明显低于空白对照组大鼠的水平（P<0.01）。与模型对照组相比,痛泻要方破壁饮片中、高剂量组大鼠血浆BDNF水平均明显降低（P<0.05）;传统饮片组、痛泻要方破壁饮片中、高剂量组大鼠血浆VIP水平均明显升高（P<0.01）;传统饮片组、痛泻要方破壁饮片低、中、高剂量组大鼠血浆SP水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）;传统饮片组、痛泻要方破壁饮片低、高剂量组大鼠血浆5-HT水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。③各组结肠和大脑组织HE染色未有明显的病理损伤,符合IBS-D临床特征。④免疫印迹法结果显示,与空白对照组相比,模型对照组大鼠结肠和大脑组织5-HT3R蛋白水平明显升高（P<0.01）;与模型对照组相比,传统饮片组和痛泻要方破壁饮片低、中、高剂量组均明显降低（P<0.01）;免疫组织化学法结果显示,与空白对照组相比,模型对照组大鼠结肠和大脑组织5-HT3R蛋白水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组相比,传统饮片组和痛泻要方破壁饮片低、中、高剂量组均明显降低（P<0.01）。与空白对照组相比,模型对照组大鼠肠嗜铬细胞数量均明显升高（P<0.05）;与模型对照组相比,传统饮片组和痛泻要方破壁饮片低、中、高剂量组均明显降低（P<0.01）。结论:①建立的HPLC法简单可靠、快速准确、重复性良好,可用于测定痛泻要方传统饮片及其破壁饮片中芍药苷、升麻素苷、橙皮苷和苯甲酰芍药苷4种活性成分的质量标准。②痛泻要方破壁及传统饮片可能通过阻断VDC通道,抑制细胞外Ca2+内流,从而促进细胞内的Ca2+外流来抑制平滑肌收缩,且破壁饮片的效果优于传统饮片。③痛泻要方破壁及传统饮片对慢性避水应激模型大鼠的肠道运动增强具有显著的改善作用,且破壁饮片的效果优于传统饮片,主要通过下调与IBS-D相关神经递质BDNF、SP和5-HT水平,上调VIP水平,下调结肠和大脑中5-HT3R蛋白表达,以及抑制肠嗜铬细胞异常增生来调控5-HT的正常分泌。因此,痛泻要方破壁及其传统饮片改善IBS-D肠道运动过速的症状,可能与调控5-HT信号通路中相关蛋白的表达有关。