【摘 要】
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选择健康公驼,假阴道法人工采精后分离精清,火焰原子吸收法测定精清中铜、锌、铁、锰,氢化物发生原子吸收测定硒,分光光度法测定氟、磷、硫的含量;用凯氏半微量定氮法、双缩
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选择健康公驼,假阴道法人工采精后分离精清,火焰原子吸收法测定精清中铜、锌、铁、锰,氢化物发生原子吸收测定硒,分光光度法测定氟、磷、硫的含量;用凯氏半微量定氮法、双缩脲法、香草醛比色法、β-甘油酸法和乳酸钠基质法测定总氮量、总蛋白量、总脂、碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶;直接烘干法测定干物质的含量;果糖与间苯二酚反应的根据比色原理测定果糖含量.用DEAE-纤维素离子交换柱(DE32)对双峰驼精清进行分离,大鼠垂体组织体外培养及母驼肌注各分离组分,RIA法测定垂体组织培养液和母驼血浆LH及FSH的浓度变化.利用阴离子交换柱Q Hyper D经蛋白质纯化仪对驼精清进一步进行分离和纯化后,共得到六个组分(F1~F6),其中F3和F5在体外大鼠垂体组织培养实验中具有生物活性,可引起LH的明显释放.进一步用C<,18>柱经HPLC或毛细管电泳对F3-3进行纯化,UV280nm处用紫外检测收集.无论在HPLC或在毛细管电泳仪下,F3-3均呈现出两个波峰,而且间隔非常近,说明F3-3是由两种分子特征非常相似的物质组成,用常规的方法很难将其分离纯化.通过该实验证明,可以利用离子交换层析法对驼精清中诱导排卵因子进行分离,并可保持其生物活性.驼精清中的诱导排卵活性因子是由一组分子特征非常相似的蛋白组成,利用常规方法不能将其纯化.另外在实验中还发现,分离到的活性组分在体外均不能引起LH和FSH的同时释放.
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