目的探讨结核分枝杆菌多聚磷酸盐激酶2（PPK2）核酸适配体（aptamer）与体外结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）共培养来评估其抑菌效果。为开发新的高效、低毒的抗结核药物提供新的方向。方法1.运用生物信息学方法分析PPK2蛋白氨基酸序列与呼吸道部分常见病原菌同源性进行分析,并构建PPK2进化树。2.将PPK2核酸适配体与MTB标准株H₃₇Rv、卡介苗（BCG）、耻垢分枝杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌,通过酶联寡核苷酸分析（enzyme-linked oligonucleotide assay,ELONA）方法测定PPK2核酸适配体与H₃₇Rv结合亲和力,用相同的方法检测PPK2适配体与正常人、结核病人血清中PPK2蛋结合的亲和力。3.将PPK2核酸适配体加入不同浓度血清中共孵育24h,运用琼脂糖凝胶电泳分析其在不同浓度血清中的生物稳定性。4.采用微量刃天青显色法测定PPK2核酸适配体对H₃₇Rv的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）。5.将H₃₇Rv与1μmol/L的PPK2核酸适配体、随机序列接种到罗氏培养基,观察PPK2适配体与随机序列对H₃₇Rv生长影响。将H₃₇Rv与PPK2核酸适配体、突变体共培养10d,运用酶标仪测定D（600nm）值,观察PPK2核酸适配体对H₃₇Rv的生长影响。6.将H₃₇Rv与PPK2适配体共培养5周,采用结晶紫染色法观察PPK2适配体对MTB生物膜生长的影响。7.将PPK2核酸适配体与细胞共培养,观察核酸适配体对细胞毒性。结果1.生物信息学方法分析构建PPK2进化树显示H₃₇Rv的PPK2蛋白与呼吸道部分常见病原菌亲缘性较远,与铜绿假单胞菌亲缘关系相对较近。2.通过ELONA测定显示PPK2核酸适配体能与H₃₇Rv的PPK2蛋白选择性结合,在正常人与结核病病人血清中PPK2核酸适配体在结核病病人血清表现出较好的亲和力。3.琼脂糖凝胶电泳分析PPK2核酸适配体在血清中至少稳定存在8h。4.PPK2核酸适配体对结核分枝杆菌标准株H₃₇Rv的MIC为50nmol/L。5.罗氏培养基菌落生长显示PPK2适配体对H₃₇Rv生长具有抑制作用。生长抑制试验表明随着PPK2核酸适配体浓度增加H₃₇Rv的D（600nm）值呈现下降趋势,说明PPK2核酸适配体对H₃₇Rv生长存在抑制作用。6.PPK2核酸适配体与MTB共培养5周,经过结晶紫染色法测定显示PPK2核酸适配体影响MTB生物膜形成。7.细胞毒性试验显示高浓度与低浓度PPK2核酸适配体对细胞均无毒性。结论1.PPK2蛋白核酸适配体对体外H₃₇Rv表现出良好的抑菌活性。2.PPK2核酸适配体能够与结核病人血清PPK2蛋白选择性结合。