褐藻胶裂解酶发酵工艺及褐藻胶酶解工艺优化

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褐藻胶作为一种常见的海藻经济多糖,在众多领域中被普遍应用。褐藻胶寡糖是褐藻胶经由水解得到的低聚糖,目前,褐藻胶寡糖的研究已涉及到药物治疗、疾病防治、植物生长等方面,它所表现出较高的生物活性也受到人们的关注。本论文利用海带表面分离的一株产微球茎菌ALW1(Microbulbifer sp.ALW1),对Microbulbifer sp.ALW1发酵产褐藻胶裂解酶摇瓶工艺进行优化,主要检测指标为褐藻胶裂解酶活力,然后在摇瓶基础上对5 L罐发酵工艺进行初步优化,接着对罐上工艺进行中试放大,最后利用褐藻胶裂解酶酶解褐藻胶对其酶解工艺进行优化。通过单因素与响应面相结合,首先优化摇瓶发酵培养基成分,然后优化发酵培养条件。得到最佳培养基成分为:海藻酸钠1.99 g/L,(NH42SO4 0.44 g/L,K2HPO4 3.31 g/L,MgSO40.6 g/L,NaCl 60 g/L,FeSO4 0.06 g/L。在此培养基成分下,褐藻胶裂解酶活力达到180.58U/mL,比基础培养基下提高7.85倍。最佳发酵条件:温度23℃,接种量6.5%,起始pH 8.0,装液量50 mL,褐藻胶裂解酶活力达到130.04 U/mL,比基础条件下提高17%左右。按照优化后的条件发酵36 h的酶活力达到183.49 U/mL,比初始发酵条件下酶活力(20.44 U/mL)提高7.98倍。采用5 L发酵罐分别对碳源浓度、温度、pH条件下产酶工艺进行研究,研究表明,海藻酸钠浓度为1 g/L时效果最好,浓度减半或加倍都会使酶活力下降。25℃比20℃更利于产酶,pH控制在7.5时比自然条件下发酵产酶高峰提前,产酶量变化不大。发酵规模放大后受放大效应的影响,20 L发酵罐酶活力最高为57.02 U/mL,200 L罐酶活力最高为43.5U/mL,500 L罐酶活力最高为38.25 U/mL,分别是小试水平的39.6%,30.2%,26.5%。以还原糖生成量及褐藻胶转化率为指标,对酶解工艺进行单因素优化,最优酶解工艺为静置条件下底物浓度7 g/L,加酶量27.5 U/mL,体系pH 7.0,温度45℃。在此条件下反应210 min,可得到还原糖浓度为1.82 mg/mL,褐藻胶转化率为35%,比初始条件下提高60%,将反应体系放大至1 L,转化率为39%。
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