α-鹅膏毒肽抑制乙型肝炎病毒复制的实验研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aig2008
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目的:观察α-鹅膏毒肽(α-amanitin)体外对乙型肝炎病毒(HBV)的作用,为研究其在体内对乙型肝炎病毒复制的抑制作用提供实验基础.方法:采用HBV DNA永久转染的肝癌细胞系HepG2.2.15为体外实验模型,经MTT法检测出α-鹅膏毒肽对HepG2.2.15细胞生长无抑制作用的药物安全浓度后,将不同安全浓度的α-鹅膏毒肽作用于该细胞系,并设置空白和阳性对照,以及溶酶对照组,72小时更换相同浓度新鲜含药培养基,并于72和144小时后收集培养上清液,并采用时间分辨免疫荧光分析法检测其HBsAg和HBeAg水平,采用实时荧光定量PCR方法检测其上清HBV DNA水平.结果:(1)经过α-鹅膏毒肽对HepG2.2.15细胞的毒性测试,得出第三天和第六天的半数有毒浓度(TC50)分别为10.19和8.47μg/ml,而在0.8μg/ml浓度以下对细胞生长无影响;(2) 72h 0.8、0.16μg/mlα-鹅膏毒肽浓度组和阳性对照组对HBsAg抑制率分别为19.88%、15.95%和46.07%,其余各组未见抑制作用;144h 0.8、0.16μg/mlα-鹅膏毒肽浓度组和阳性对照组对HBsAg抑制率分别为47.40%、29.30%和55.71%,其余各组未见抑制作用;(3) 72h 0.8μg/mlα-鹅膏毒肽浓度组和阳性对照组对HBeAg抑制率分别为14.16%和31.86%,其余各组未见抑制作用。144h 0.8、0.16和0.032μg/mlα-鹅膏毒肽浓度组和阳性对照组对HBeAg抑制率分别51.52%、45.84%、29.09%和59.14%。0.0064μg/mlα-鹅膏毒肽组未见抑制作用。(4)72h 0.8、0.16μg/mlα-鹅膏毒肽浓度组和阳性对照组对HBV DNA抑制率分别为29.25%、21.96%和33.30%,其余各组未见抑制作用。144h 0.8、0.16、0.032μg/mlα-鹅膏毒肽浓度组和阳性对照组对HBV DNA抑制率分别为51.74%、42.12%、34.29%和48.20%。其余各组未见抑制作用。结论:(1)α-鹅膏毒肽对HepG 2.2.15细胞有一定毒性,第三天和第六天的半数毒性浓度(TC50)分别为10.19和8.47μg/ml,但在0.8μg/ml及其以下浓度α-鹅膏毒肽对细胞生长无影响;(2)α-鹅膏毒肽在0.8μg/ml以下的一定浓度范围内在HepG2.2.15细胞培养中可有效抑制细胞HBsAg、HBeAg和HBV DNA的分泌,且在一定浓度范围内随着时间的延长和药物浓度的增加,抑制率明显增加。
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