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硒是人体必需的微量元素之一。在哺乳动物体内,硒的功能主要是通过各种硒酶和硒蛋白实现。随着对谷胱甘肽过氧化物酶研究的深入,研究人员发现硒是GPX催化反应的必要组分,且以硒代半胱氨酸(selenocysteine, Sec)的形式作为酶的催化基团发挥作用。令人感兴趣的是,Sec是由终止密码子UGA编码,以共翻译的形式插入到新生肽链中。因此,Sec又被称为第21种氨基酸。在Escherichia coli中,Sec的表达效率只有正常氨基酸的1-3%,因此硒蛋白的体内表达量非常低。而且,Sec插入依赖的原核生物硒代半胱氨酸插入序列(Selenocysteine Insertion Sequence, SECIS)具有种属特异性,因而表达异源硒蛋白需要引入大肠杆菌的SECIS元件。在本文的前期工作中,已经利用Sec替代野生型GST活性部位的催化残基Tyr,将其转换为含有Sec的GST突变体。因此在本文的工作中,为了检测突变后的UGA的通读效率我们将构建绿色荧光蛋白报告基因载体,并利用绿色荧光蛋白定量测定UGA的通读效率。绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein, GFP)能够通过翻译后自催化环化产生荧光,除了氧分子外不需要其他任何底物或辅因子。由于其无宿主选择性,毒性低以及稳定性高等优点,被广泛应用于生命研究领域。我们通过在由硫氧还蛋白和GFP组成的融合蛋白之间的Linker内部引入UGA密码子和SECIS元件,构建了定量测定UGA通读效率的报告基因系统。实验结果表明,在SECIS元件存在下,UGA的通读效率增加至1.32倍。在与selC基因共表达时,UGA的通读效率增加至1.53倍。而在与selA,selB和selC基因共表达时,UGA的通读效率增加至2.0倍。因此,与β-半乳糖苷酶相比,GFP可以作为测定大肠杆菌中UGA密码子通读效率的方便、快捷的工具,同时也显示了应用GFP测定哺乳动物细胞培养物和组织样品中乳白抑制作用的应用潜力。