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目的:1.通过检测阿司匹林(ASA)对人骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞的PIK3CA基因及蛋白表达的影响,探讨PIK3CA基因作为ASA抗骨髓瘤作用靶点的可行性。2.通过沉默PIK3CA基因后检测ASA对RPMI-8226细胞增殖活性的影响,及其下游效应蛋白pAKT的变化,探讨PIK3CA基因在ASA抗骨髓瘤效应中的作用及分子机制。方法:1.采用CCK-8方法,检测不同浓度ASA(0、2.5、5、10mmol/L)处理RPMI-8226细胞24h、48h、72h后细胞增殖变化。2.采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测不同浓度ASA对RPMI-8226细胞PIK3CA基因及蛋白表达水平。3.利用siRNA干扰技术,将PIK3CAsiRNA转染RPMI-8226细胞,荧光显微镜下观测细胞转染效果,实时荧光定量PCR检测PIK3CA m RNA表达以检测基因沉默效果。4.采用CCK-8方法,检测沉默PIK3CA基因后,ASA处理后RPMI-8226细胞增殖抑制变化。5.采用流式细胞仪,检测沉默PIK3CA基因后,ASA处理后RPMI-8226细胞凋亡与周期变化。6.采用Western blot法,检测沉默PIK3CA基因后,ASA处理后RPMI-8226细胞AKT与pAKT蛋白表达的变化。结果:1.在2.5~10mmol/L范围内,ASA以剂量依赖性抑制骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞增殖。在24~72h内,ASA对RPMI-8226细胞的增殖抑制率呈时间依赖性。2.在2.5~10mmol/L范围内,ASA以剂量依赖性抑制RPMI-8226细胞的PIK3CA基因与蛋白表达。3.PIK3CAsiRNA转染RPMI-8226细胞后,PIK3CA基因表达下降83.2%,表明基因沉默效果较好。4.与对照组相比,PIK3CAsiRNA转染后,ASA对RPMI-8226细胞的抗增殖活性明显下降,且并不随ASA浓度增大而变化。5.与对照组相比,PIK3CAsiRNA转染后,ASA对RPMI-8226细胞的凋亡诱导活性明显下降。6.与对照组相比,PIK3CAsiRNA转染后,ASA对RPMI-8226细胞的G1期阻滞作用明显下降。7.ASA以剂量依赖性抑制RPMI-8226细胞pAKT蛋白表达,但不影响总AKT蛋白表达。沉默PIK3CA基因后,ASA对RPMI-8226细胞pAKT蛋白抑制作用明显减弱。结论:1.ASA以浓度依赖性抑制骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞的PIK3CA基因及蛋白表达。2.PIK3CA基因沉默可明显减弱ASA对RPMI-8226细胞的增殖抑制、凋亡诱导效应及细胞周期G1期阻滞作用。3.沉默PIK3CA基因显著降低ASA对RPMI-8226细胞AKT磷酸化的抑制作用。4.ASA通过抑制PIK3CA基因及下游效应分子AKT磷酸化而起抗骨髓瘤作用。