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目的:单宁酸(Tannic acid,TA)是一种植物多酚,来源于茶叶、水果、酒、蔬菜等。单宁酸具有抗炎、抗氧化、防止心肌重构、防止缺血再灌注损伤等作用。国内外学者在多种肿瘤中证明其有抗癌作用。但是单宁酸对卵巢癌作用的相关研究少有报道,其潜在的抗癌机制尚未阐述清楚。聚(ADP-核糖)水解酶(Poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG)参与DNA的损伤修复,能够水解聚(ADP-核糖)聚合物(Poly(ADP-ribose),pADPr),PARG在肿瘤的诱发、肿瘤的发展及预后等发面发挥重要作用。研究发现单宁酸能够抑制PARG,改变pADPr的活性。本实验探讨单宁酸单独或是联合顺铂对卵巢癌SKOV-3细胞系及SKOV-3 CDDP/R细胞系增殖和凋亡的影响,探讨单宁酸能否通过影响DNA损伤修复相关酶的活性增加卵巢癌细胞系对顺铂的敏感性。 方法:运用MIT方法检测不同浓度的单宁酸(0-40μmol/L)及顺铂(0-20μg/mL)对SKOV-3细胞系及SKOV-3 CDDP/R细胞系的增殖影响;选取低毒性剂量的单宁酸及顺铂联合作用于SKOV-3细胞系和SKOV-3 CDDP/R细胞系,利用联合作用指数分析单宁酸与顺铂相互作用关系;DAPI染色后利用荧光显微镜观察单宁酸及顺铂对细胞核形态的影响;Annexin-V/PI染色后,利用流式细胞仪分析单宁酸及顺铂对SKOV-3细胞系和SKOV-3 CDDP/R细胞系凋亡的影响;利用荧光显微镜观察pADPr免疫荧光的积聚;激光共聚焦显微镜检测凋亡诱导因子(apoptosis induce factor,AIF)从细胞浆到细胞核的移位;应用Western blot检测PARG、caspase-3及AIF的蛋白表达。 结果:在SKOV-3细胞系及SKOV-3 CDDP/R细胞系中,10μmol/L单宁酸处理24 h后,SKOV-3 CDDP/R细胞的存活率减少到67.83%±14.10,SKOV-3细胞系的存活率减少到76.64%±6.96。5μg/mL顺铂与10μmol/L单宁酸联合处理24h后,SKOV-3细胞生长抑制率为77.65%±2.10,SKOV-3 CDDP/R细胞的生长抑制率为54.87%±1.24,联合作用指数CI均小于1,证实单宁酸与顺铂二者有协同作用。在卵巢癌细胞系经过5μg/mL顺铂、10μmol/L TA单独或是联合处理后,DAPI染色显示单宁酸联合顺铂,能促进细胞核染色体凝集,凋亡小体形成。流式细胞仪结果显示单宁酸联合顺铂,SKOV-3 CDDP/R细胞系凋亡百分率为42.90%±9.8,SKOV-3细胞系为32.02%±5.01,与药物单独处理组相比,#P<0.05。Western blot结果显示,在控制组及顺铂处理组,可以检测到PARG蛋白的表达;单宁酸单独处理组及单宁酸与顺铂联合处理组,几乎检测不到PARG蛋白的表达,说明单宁酸能够抑制PARG表达。免疫荧光结果显示,单宁酸与顺铂联合处理后pADPr的荧光积聚增加,促进AIF从细胞浆到细胞核的移位。蛋白印迹结果显示,单宁酸与顺铂联合处理组细胞内凋亡诱导因子AIF蛋白表达增多,促进caspase-3的活化。 结论:单宁酸对SKOV-3及SKOV-3 CDDP/R两种卵巢癌细胞系的细胞增殖有抑制作用;单宁酸增加顺铂抗肿瘤作用可能与抑制PARG表达,改变pADPr活性,通过caspase-3依赖的和caspase-3非依赖的凋亡途径发挥抗肿瘤作用。本实验为单宁酸作为抗肿瘤药或是化疗药物的增敏药的临床应用提供了理论依据。