微小病变肾病一直是国内外研究的热点，阿霉素(adriamycin, ADR)肾病是公认的类似人类微小病变肾病的动物模型。国内外学者对微小病变肾病发病机理作了大量研究，认为可能是遗传、病毒感染介导的细胞因子异常、过氧化损伤、细胞免疫的改变等因素，导致了肾小球滤过膜病变，引起大量蛋白尿为主的一系列临床表现。其中肾小球滤过膜改变是最关键的环节。本病的治疗以激素及免疫抑制剂为主，辅以抗氧化剂、降脂药物、ACEI类药物及中药等。新型免疫抑制剂效果强，副作用小，已倍受重视，例如他克莫司(FK506)、雷帕霉素(rapamycin, RAP)都是研发的热点。目前研究认为环胞素对肾病综合征治疗有效率可达75%～90%，但是环胞素治疗过程中可出现肾毒性，即局灶性小管间质损害；雷帕霉素是一种高效低毒的免疫抑制剂，通过与FKBP12(FK506结合蛋白)结合，发挥其免疫抑制作用，目前尚无雷帕霉素作用于肾病大鼠的报道。日本学者川口吾曾报道过FK506可降低肾病大鼠的蛋白尿，减轻肾小球足突融合及基底膜负电荷位点丢失的程度。而雷帕霉素和FK506作用受体相同，结构相似，可能会对肾病大鼠产生相似的影响。目的：本研究通过建立大鼠肾病综合征模型，进行不同药物、不同组别的对照研究，观察不同剂量的雷帕霉素对肾病大鼠的血、尿生化指标，及肾小球基底膜负电荷位点的<WP=4>影响，并与环胞素作对照，为雷帕霉素应用于人类肾病综合征的治疗提供一定的实验依据。方法：实验动物为健康雄性SD大鼠，体重220g左右（河北医科大学动物中心）。实验用药是盐酸阿霉素（汕头明治医药公司）、雷帕霉素（华北制药集团）、环胞素（华北制药集团）。 复制肾病综合征动物模型：取健康雄性SD大鼠，在非麻醉状态下，按5mg/kg从大鼠的尾静脉一次性注射盐酸阿霉素，健康对照组尾静脉注射等量的生理盐水。 分组和给药：实验分5组，每组8只大鼠。分别为：健康对照组即A组，病理模型对照组即B组，环胞素组即C组，雷帕霉素1组即D组，雷帕霉素2组即E组。其中B、C、D、E组均按上述方法复制成肾病综合征模型，C、D、E组按以下的药物剂量每日一次灌胃给药：C组环胞素10mg/kg?d，D组雷帕霉素3mg/kg?d，E组雷帕霉素6mg/kg?d，灌胃给药共14天，整个实验56天。观察指标：分别于第0、7、14、56天测定各组大鼠的24小时尿蛋白定量、血清白蛋白、总胆固醇、尿素氮、肌酐；实验第14天，A、B两组各随机取三只大鼠的肾组织行光镜、透射电镜观察；实验第56天，A、B、C、D、E五组每一组随机取三只大鼠的肾组织行光镜、透射电镜和组化电镜观察，其中组化电镜以聚乙烯亚胺（PEI）为阳离子探针标记肾小球基底膜负电荷位点，并用每1000nm长度的基底膜（靠近足突侧）负电荷位点的个数来表示。结果：肾病综合征动物模型的复制：血、尿生化指标（见表1）。大鼠自注射阿霉素第14天，就开始出现大量蛋<WP=5>白尿（120.18±51.34mg/24h），同时出现低白蛋白血症和高胆固醇血症。肾脏组织学改变：A组：光镜下，肾小球无异常；电镜下亦无异常。B组：注射阿霉素14天后，电镜下即可见足突的融合。依据血、尿生化指标的改变和电镜的结果，表明肾病综合征大鼠模型已复制成功。雷帕霉素对肾病大鼠的血、尿生化指标的影响：实验第56天，B、C、D、E四组的24小时尿蛋白定量、血清胆固醇均高于A组，而血清白蛋白均低于A组，各组与A组比较有显著性差异(P＜0.05)；C、D、E三组24小时尿蛋白定量、血清胆固醇均低于B组，血清白蛋白均高于B组，与B组比较有显著性差异，提示雷帕霉素和环胞素可减少肾病大鼠尿蛋白；D、E两组24小时尿蛋白定量低于C组，血清白蛋白高于C组，与C组比较有显著性差异，提示雷帕霉素对降低肾病大鼠尿蛋白有效，且效果优于环胞素。雷帕霉素对肾病大鼠的肾组织学的影响：A组：光镜及普通电镜均正常，组化电镜：基底膜负电荷位点分布均匀。B组：肾脏肉眼观呈“大白肾”状，光镜下无明显异常，电镜下肾小球基底膜无明显增厚，上皮细胞明显空泡变性，可见微绒毛形成，系膜区可见较多的电子致密沉积物，足突广泛融合。组化电镜可见基底膜负电荷位点明显减少。C组：光镜下肾小球未见明显异常，电镜下可见足突部分融合，组化电镜下基底膜负电荷位点基本分布均匀。D、E组：光镜下，细胞成分无明显增多，肾小球无明显改变，电镜下足突分布基本均匀正常，组化电镜下基底膜负电荷位点基本分布均匀，未见明显减少。小结：本研究在国内外首次观察雷帕霉素对肾病大鼠<WP=6>的影响，并且发现：⑴雷帕霉素可以改善阿霉素肾病大鼠的一般状态，改善其血、尿生化指标，减少24小时尿蛋白量，增加血清白蛋白，降低血清胆固醇水平，且效果优于环胞素。⑵雷帕霉素可缓解肾病大鼠的肾脏形态学的损伤，且效果优于环胞素。⑶应用敏感的PEI负电荷位点染色方法，成功地标记了肾小球基底膜的负电荷位点。雷帕霉素处理后的肾病大鼠基底膜负电荷位点基本分布均匀，未见明显减少，表明明雷帕霉素可减少肾病大鼠的基底膜的负电荷位点的丢失。本研究为雷帕霉素应用于临床治疗肾病患者提供了一定的实验依据。