【摘 要】
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目的:探讨从成年大白兔周围神经分离、纯化、培养获取大量雪旺细胞的有效手段,观察微囊化兔雪旺细胞体外培养过程中的形态与增殖特征,为神经损伤后修复提供实验基础。 方法:利
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目的:探讨从成年大白兔周围神经分离、纯化、培养获取大量雪旺细胞的有效手段,观察微囊化兔雪旺细胞体外培养过程中的形态与增殖特征,为神经损伤后修复提供实验基础。 方法:利用成年兔发生Wallerian变性的双侧坐骨神经,经改良后反复差速贴附法进行培养,快速分离纯化雪旺细胞,通过相差显微镜下观察雪旺细胞状态计数和S-100细胞免疫组化染色相结合鉴定,观察其生长并绘制生长曲线,按照细胞倍增时间公式计算其倍增时间。随后,海藻酸钠-氯化钡一步成囊法包裹生长良好的第三代雪旺细胞,继续培养观察,运用MTT法测定微囊包裹的雪旺细胞和单纯雪旺细胞的增殖反应。 结果:发现利用发生Wallerian变性后的兔双侧坐骨神经,经改良后差速贴壁培养方法能够明显抑制成纤维细胞的生长,获得大量雪旺细胞,经S-100蛋白免疫组化鉴定,雪旺细胞纯度达95%以上,细胞数量达1×10~6/ml以上;绘制其生长曲线,并计算得出体外培养的第三代雪旺细胞体外倍增时间为3d;MTT实验检测:经微囊包裹的雪旺细胞增殖速度明显弱于未经包裹的单纯雪旺细胞对照组,两者之间差别有统计学意义(P<0.05)。 结论:本培养方法能够获得大量高纯度的雪旺细胞,微囊包裹后的雪旺细胞体外生长良好,增殖速度较单纯雪旺细胞而言有所减慢。
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