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目的在对映体层面上研究拟除虫菊酯类农药顺式联苯菊酯(cis-BF)对H295R细胞肾上腺皮质激素分泌的选择性干扰效应及其作用机制。方法利用高效液相色谱系统和手性色谱柱对cis-BF两对映体(1S-cis-BF和1R-cis-BF)进行拆分,并通过气相色谱系统和圆二色光谱仪对单个对映体分别进行定量分析和构型判定。选取H295R细胞为研究模型,将细胞暴露于不同浓度(0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L)1S-cis-BF/1R-cis-BF 或 1S-cis-BF/1R-cis-BF 与 8-Br-cAMP(500 μmol/L)的混合物24 h,同时设置DMSO(0.1%,v/v)为溶剂对照组、8-Br-cAMP(500 μmol/L)为阳性对照组。用MTS法检测细胞增殖活性,确定染毒浓度。用ELISA法检测细胞上清液中皮质醇、醛固酮水平和细胞内cAMP含量,并用RT-qPCR法分析类固醇激素合成相关酶(StAR、P450scc、3βHSD2以及CYP17)mRNA的表达水平。结果cis-BF两对映体在高效液相色谱系统和手性色谱柱上成功得到分离,且1S-cis-BF和1R-cis-BF纯度均在99%以上。MTS结果显示,高浓度(1、10 μmol/L)1S-cis-BF/1 R-cis-BF对细胞增殖活性有刺激作用(P<0.05),因此本研究选择无细胞毒性浓度(0.001、0.01、0.1μmol/L)为cis-BF对映体的染毒浓度。激素测定结果显示,与溶剂对照组相比,0.001、0.01、0.1 μmol/L 1S-cis-BF/1R-cis-BF均显著降低本底皮质醇分泌水平(P<0.05),且 1S-cis-BF对本底皮质醇分泌的抑制作用分别是1R-cis-BF的1.49、1.68和1.04 倍,0.001、0.1mol/L 1S-cis-BF与0.1 μmol/L1R-cis-BF均明显降低本底醛固酮分泌水平(P<0.05),在0.1μmol/L浓度组1S-cis-BF对本底醛固酮分泌的抑制作用是1R-cis-BF的2.16倍,具有显著的对映体差异(P<0.05);与阳性对照组相比,1S-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的皮质醇和醛固酮分泌水平随着浓度的增加而降低,而1R-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的皮质醇和醛固酮分泌水平无明显改变,两对映体染毒组激素水平变化无显著性差异。RT-qPCR结果显示,与溶剂对照组相比,0.1 μmol/L 1S-cis-BF 显著下调本底 StAR、P450scc、3βHSD2 和 CYP17 mRNA表达水平(P<0.05),0.01、0.1 μmol/L 1R-cis-BF 显著下调本底 3βHSD2 mRNA 表达水平(P<0.05),且在 0.1 μmol/L 浓度组,1S-cis-BF 对本底 StAR、3βHSD2 和 CYP17 mRNA表达水平的抑制作用分别是1R-cis-BF的2.23、2.04和5.00倍,具有显著的对映体差异(P<0.05);与阳性对照组相比,随着浓度的升高,1S-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的StAR、P450scc、3βHSD2和CYP17mRNA表达水平的抑制作用越明显,其中在0.1 μmol/L浓度组3βHSD2和CYP17 mRNA表达下调幅度有统计学差异(P<0.05),而1R-cis-BF对8-Br-cAMP诱导的此四种基因的表达有下调趋势,但差异没有统计学意义,两对映体染毒组四种酶基因转录水平无统计学差异。cAMP测定结果显示,与对照组相比,0.1 μmol/L 1S-cis-BF染毒致细胞内cAMP含量降低了 8.10%(P<0.05),0.1μmol/L 1R-cis-BF处理组细胞内cAMP含量略有降低,但差异没有显著性,且在0.1 μmol/L浓度组,1S-cis-BF的抑制作用是1R-cis-BF的1.95倍,具有显著的对映体差异(P<0.05)。结论cis-BF两对映体都能不同程度地抑制H295R细胞肾上腺皮质激素的分泌水平,且1S-cis-BF比1R-cis-BF具有更强抑制作用。cis-BF对映体主要通过阻碍cAMP信号通路,下调下游类固醇激素合成酶mRNA表达水平,从而引起肾上腺皮质激素分泌异常。