脑衰反应调节蛋白4亚型对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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目的:探讨CRMP 4a和CRMP 4b在胃癌中的表达以及对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:第—部分:收集30例武汉大学中南医院胃癌切除的组织标本,采用qPCR和western blot检测胃癌组织及癌旁组织中CRMP 4a和CRMP 4b的表达;采用qPCR和western blot检测CRMP 4a和CRMP 4b在胃癌细胞株BGC823、 GC981、HGC27、MGC 803、NCI N87中的表达。第二部分:制备CRMP 4a过表达和CRMP 4b sh-RNA慢病毒悬浮液,取0.5 mL加入胃癌细胞培养液,37。C孵育过夜,采用适当的puromycin浓度筛选稳定表达细胞株。第三部分:培养上述稳定细胞株,采用MTS检测细胞增殖,采用流式细胞仪检测细胞周期以及凋亡,采用Transwell检测细胞迁移和侵袭,采用平板克隆检测克隆形成能力,采用FN/LN蛋白粘附检测细胞粘附能力,采用western blot检测凋亡相关蛋白。第四部分:四组的雄性裸鼠分别在右腋窝区域皮下注射4×106个稳定转染细胞制备移植瘤模型。肿瘤大小用卡尺测量。肿瘤体积计算使用公式(L×W2)/2计算,其中L与W分别是肿瘤长度和宽度。结果:第一部分:,胃癌组织中的CRMP 4a的]mRNA和蛋白表达量显著低于癌旁组织(P<0.05);而胃癌组织中的CRMP 4b的mRNA和蛋白表达则显著升高(P<0.05);与正常胃粘膜细胞GES1相比,胃癌细胞株BGC823、GC981、HGC27、 MGC803和NCIN87由CRMP 4a的mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),其中在MGC803细胞中表达量最低;而CRMP 4b的mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05),其中在BGC823细胞中表达量最高。第二部分:CRMP 4b抑制表达稳定细胞株构建成功,采用qPCR和western blot检测显示CRMP 4b的表达水平显著降低(P<0.05),而CRMP 4a的表达水平基本不变(P>0.05)。CRMP 4a过表达稳定细胞株构建成功,采用qPCR和western blot检测CRMP 4a的表达水平显著升高(P<0.05),而CRMP 4b的表达水平无明显变化(P>0.05)。第三部分:干扰CRMP 4b的表达显著降低胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和粘附能力(P<0.05),而对胃癌细胞的凋亡以及Bcl 2、Caspase 3和Caspase 8无影响(P>0.05)。过表达CRMP 4a可显著降低胃癌细胞的增殖、胃癌细胞的侵袭、迁移和粘附能力(P<0.05),而对胃癌细胞的凋亡以及Bcl 2、Caspase 3和Caspase 8无明显影响(P>0.05)。第四部分:本研究结果显示sh-CRMP 4b和过表达CRMP 4a能够显著抑制胃癌肿瘤组织的形成,降低肿瘤体积和重量(P<0.05)。结论:在胃癌中CRMP 4a表达降低,发挥抑癌作用;而CRMP 4b表达升高,发挥促癌作用。CRMP 4的两种亚型CRMP 4a和CRMP 4b在调节胃癌细胞增殖、侵袭和迁移中功能相反。
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